不同材质细胞培养容器培养甲型肝炎病毒的比较

目的比较中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂两种材质的培养容器培养人二倍体细胞和甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的差异。方法采用相同的培养条件,在中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,并接种HAV H2株,倒置光学显微镜下观察细胞的形态变化;细胞接种病毒后第0、7、14、18、22、26、30天时取样,ELISA法测定病毒的感染性滴度,分析病毒的增殖动力学。结果两种材质的容器培养的KMB17细胞的生长状态和形态无明显差异;HAV H2株增殖动力学相似;单位体积病毒收获液中的病毒产量无显著差异;聚苯乙烯细胞工厂培养的HAV的单位培养容积产量是中性玻璃转瓶的7.28倍。结论聚苯乙烯细胞工厂和中性玻璃转瓶培养的人二倍体细胞和HAV均能良好生长,细胞工厂可替代转瓶成为新的疫苗规模化生产的细胞培养技术。     

中国部分地区甲型肝炎病毒基因型分析

目的　分析中国部分地区甲型肝炎病毒 (HepatitisAvirus,HAV)的基因型。方法　采自辽宁 (LN1、LN2、LN3 )、上海 (Lu3 8)和云南 (YN)甲型肝炎病人的粪便标本共 5份 ,从中分离纯化HAV并提取病毒RNA ,以逆转录 半嵌套聚合酶链式反应 (RT hnPCR)合成VP1 2A交接区及VP1氨基端 ,经克隆筛选后进行测序分析。结果　所分离到的 5株HAV野毒株VP1 2A交接区 168个核苷酸 (nt)的片段与IB亚型的野毒株HM175比较 ,核苷酸差异 >7.5 % ;与IA亚型的日本野毒株AH1、AH2、AH3、FH1、FH2和FH3比较差异 <7.5 % ,因而均属IA基因亚型。但与IB亚型的野毒株MBB比较 ,LN1、LN3和Lu3 8在该区域的核苷酸差异 <7.5 %。进一步将LN1的VP1 2A交接区 3 3 9nt的片段、LN3和Lu3 8的VP1氨基端的核苷酸序列与MBB进行比较 ,核苷酸差异 >7.5 % ,表明这 3株HAV仍属IA基因亚型。结论　所分离到的HAV野毒株LN1、LN2、LN3、Lu3 8和YN均属IA基因亚型     

2009年云南省昆明地区柯萨奇病毒B5的遗传特性分析

目的对2009年中国云南省昆明地区柯萨奇病毒B5(Coxsackievirus group B5,CVB5)的部分VP1基因序列进行分析,以了解CVB5的遗传特性。方法收集2009年中国云南省昆明地区临床诊断为无菌性脑炎患儿的200份粪便标本,设计针对CVB的通用引物,利用半巢式RT-PCR扩增部分VP1基因。PCR产物直接测序后,采用Omiga和Mega 5.05等生物学软件进行核苷酸、氨基酸序列及系统进化分析。结果共分离出7株CVB5,其部分VP1基因之间的核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,分别为92.7%～98.5%和93.6%～100.0%;与中国其他不同地区参考株的核苷酸序列同源性为80.1%～99.1%,其中与中国山东株98388-SD-CHN-1998同源性较低;与中国其他不同地区参考株的氨基酸序列同源性为84.4%～100.0%,其中与中国河南株CoxB5-Henan-2010和中国山东株98388-SD-CHN-1998之间同源性最低;与其他不同国家参考株比较,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别在77.5%～89.1%和92.1%～96.3%之间;与原型株Faulkner的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为79.6%～80.9%和92.1%～95.4%。基因系统进化分析显示,分离的7株CVB5属于相对独立的1个分枝,中国流行株除98388-SD-CHN-1998外,构成1个分枝。结论 2009年中国云南省昆明地区CVB5流行株属于相同基因型。     

制药企业水系统的节能运行

水系统运行要求保温、循环持续运行,通常其辅助动力系统值班运行时能耗非常高。如何合理选用节能辅助动力设备,以节约能源降低水系统能耗,是制药企业必须解决的问题。通过实例比较,介绍如何计算选择节能辅助动力设备的具体方法,对药企水系统节能降耗具有实际应用推广价值。     

一株鼻病毒A22型的分离鉴定及其VP1基因遗传特征分析

目的分析2011年昆明市手足口病患儿粪便中分离获得的人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)A22型分离株KM4/2011全长VP1基因的遗传特征。方法采用KMB17细胞对手足口病患儿粪便样本中筛查出的1株HRV样品进行病毒分离,应用RT-PCR法扩增病毒VP1基因,并进行测序,采用BLAST软件对所测定的节段序列进行数据库比对;采用Geneious basic 5.6.5软件进行核苷酸和氨基酸同源性比对;采用Mega 5.05软件将HRV A22及部分HRV A、B和C群全长VP1基因构建系统进化树。结果分离株为KM4/2011,经扩增、测序和序列拼接获得长度为867 bp的VP1基因;KM4/2011株与其他HRV分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为48.1%~91.0%和38.2%~97.6%,其中与HRV A22分离株的核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为90.8%~91.0%和97.3%~97.6%;基因进化树分析显示,KM4/2011株与HRV A22基因型属于同一个进化分枝。结论 KM4/2011分离株为HRV A22型,存在地域差异。     

双佐剂新型冠状病毒灭活疫苗免疫原性及中和效价的测定

在Balb/c小鼠模型上,评价双佐剂新型冠状病毒灭活疫苗的免疫效果及中和抗体水平.新型冠状病毒经Vero细胞培养、收获、浓缩、灭活、纯化等一系列步骤,制成灭活疫苗原液,以不同的配方剂量添加CpG佐剂和氢氧化铝佐剂后,免疫Balb/C小鼠,然后检测小鼠血清特异性抗体水平及中和抗体效价水平.结果表明:低、中剂量新冠抗原添加低、中剂量的CpG佐剂后,可以有效地提高S蛋白特异性抗体效价水平及中和抗体效价水平,效果远大于单独铝佐剂组;但CpG剂量如果过高,会有抑制效果.添加CpG佐剂后,可以使新冠病毒灭活抗原在较低的剂量下,就能产生较高水平的S蛋白特异性抗体效价及中和抗体效价.     

一株引起病毒性脑炎的埃可病毒30型分离株的VP1基因序列特征分析

目的分析2009年昆明市病毒性脑炎患儿粪便中分离获得的埃可病毒30型(Echovirus30,Echo30)分离株A363/KM/2009全长VP1基因序列特征。方法从疑似病毒性脑膜炎患儿粪便样本中分离Echo30,提取病毒RNA,采用RT-PCR法扩增病毒VP1基因,并进行测序。采用NCBI BLAST软件对所测定的序列进行数据库比对;采用Geneious软件对Echo30分离株全长VP1基因的核苷酸及氨基酸同源性进行分析;采用Mega 5.1软件对A363/KM/2009分离株进行VP1基因分析,并与20个参考株的VP1序列进行比较。结果分离株为A363/KM/2009,其VP1基因的核苷酸长度与其他Echo30一致,均为867 bp;与其他Echo30分离株核苷酸同源性在76.9%~95.7%之间,氨基酸同源性在88.7%~99.7%之间;与中国株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为84.5%~95.7%和96.9%~99.7%,其中与中国浙江分离株Echo30/zhejiang/10/4的同源性最高,为95.7%;与广西分离株GX10/15的同源性最低,为84.5%。氨基酸序列分析显示,与其他中国株包括脑脊液分离株相比,未见特异的突变位点;与国外分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为76.9%~86.3%和88.7%~97.3%;基因进化树分析显示,与其他中国株分属不同的两个分支,而与Echo30/zhejiang/10/4和Echo30/zhejiang/4/04(CSF)株亲缘关系较近。结论 A363/KM/2009分离株为肠道病毒Echo30,属于中国两个分支中的一支。     

疫苗生产溶液管道化输送智能无菌配液终端的设计及应用

<正>通常二倍体细胞培养采用细胞工厂静置培养或大瓶旋转培养技术,规模化生产溶液的输送量非常大,转运所使用的移动罐也较多,跨越洁净区域培养液的输送、溶液分配过程的保温以及使用后转运容器的清洗灭菌等均存在问题,且需花费大量人力物力。使用管道化输送系统可解决上述问题,而分配终端的清洗灭菌及控制是该系统的关键。本文介绍了一种疫苗生产程序化溶液管道输送及智能无菌配液终端的设计方法,对疫苗产业化推广应用具有一定意义。     

生产场地变更后甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)的抗原特性

目的研究生产场地变更后,原生产工艺制备的甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)的抗原特性。方法采用双抗体夹心ELISA法检测在新场地制备的甲肝灭活疫苗病毒浓缩液和疫苗原液的甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原含量。SDS-PAGE和Western blot分析二者的蛋白组分和特异性;疫苗成品(成人剂量)稀释为不同剂量(640、320、160、80和40 EU),免疫ICR小鼠(并设铝佐剂对照组),采用竞争ELISA法检测小鼠血清中HAV抗体效价;同时称量免疫后不同时间小鼠体重。结果病毒浓缩液和疫苗原液的HAV抗原含量分别为12 800和3 200 EU/ml。疫苗原液中仅含HAV结构蛋白组分,且可与HAV抗体特异性结合。初免后28 d,640、320和160 EU剂量疫苗组小鼠血清抗体阳转率为100%,80和40 EU剂量疫苗组二免后血清抗体阳转率达100%和90%,所有免疫组小鼠血清抗体效价二免后14 d较初免28 d上升约2倍;疫苗免疫组小鼠体重及体重增幅与佐剂对照组相比,均无药物作用引起的异常变化(P0.05)。结论在新场地采用原生产工艺制备的甲型肝炎灭活疫苗原液有单纯的抗原蛋白组分和免疫学特异性,且与前期研究结果相比,其免疫原性及安全性具有一致性。     

甲型肝炎灭活疫苗接种普通狨猴的安全性和免疫原性

目的观察本实验室研制的甲型肝炎灭活疫苗的安全性和免疫原性。方法甲型肝炎病毒吕－８ 株在人胚肺二倍体细胞（ＫＭＢ１７）中增殖,收获的病毒液用福尔马林灭活制成实验性疫苗,接种普通狨猴。结果有 特异性抗ＨＡＶ产生,无血清酶活性升高和肝组织病理学改变。接种疫苗的狨猴均能抵抗甲肝病毒强毒株的攻击, 而对照组均出现酶活性升高和肝组织病理学改变。结论该疫苗具有良好的免疫原性和可靠的安全性。