基于核酸分子学方法的肉类成分鉴别技术研究进展

近年来,肉类掺假问题频繁发生。基于核酸的分子生物学肉类成分鉴别技术已成为研究热点,其具有灵敏度高、特异性强、检测时间短以及成本低的优点。本文综述了基于核酸分子学的肉类成分种属鉴别技术在肉类掺假检验中的应用,着重于量化各种方法的检测限,并重点对实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和数字PCR技术在动物成分鉴别定量分析的研究现状与前景做介绍。探讨不同来源的靶基因(核DNA和线粒体DNA)在动物成分鉴别中,定性和定量检测灵敏度与特异性的区别。     

松口蘑菌丝体蛋白质诱导细胞凋亡

采用深层发酵技术培养菌丝体并提取分离出的蛋白质,进行体外抗人子宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导细胞凋亡机理的研究.试验发现松口蘑菌丝体水提液中活性蛋白质TMP在体外具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,扫描电镜观察到TMP处理细胞产生明显的凋亡小体,TMP对细胞周期的影响是通过抑制细胞从S到G2M期的转化来抑制HeLa细胞增殖,诱导细胞发生凋亡的.DNA电泳出现以200bp左右为单位的DNA碎片.结果表明采用液体培养方法生产的松口蘑菌丝体蛋白质,具有显著的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用.     

DNA聚合酶基因pfu的克隆及初步表达

通过分子克隆技术从嗜热极端微生物Pyrococcus furiosus中克隆出高热稳定性的pfuDNA聚合酶基因,琼脂糖凝胶电泳显示基因片段的长度为2.3kb,将其转化入大肠杆菌中并获得初步表达.重组酶成功地扩增了800bp的DNA片段.     

DNA聚合酶基因pfu的克隆及初步表达

通过分子克隆技术从嗜热极端微生物Pyrococcus furiosus中克隆出高热稳定性的pfu DNA聚合酶基因，琼脂糖凝胶电泳显示基因片段的长度为2．3kb，将其转化入大肠杆菌中并获得初步表达。重组酶成功地扩增了800bp的DNA片段。     

基于SNP标记的肉类溯源技术

本文阐述了建立肉类溯源系统对我国食品安全和国际贸易的重要性,并对溯源管理、食品溯源系统进行概述.重点讲述各种DNA标记技术的原理、利弊,以及在肉制品溯源标记应用的比较、SNP位点的检测方法等.最后指出了我国肉类溯源技术研究的方向和趋势.     

9Cr18Mo钢圆柱试件淬火过程的数值模拟

采用有限元分析方法,利用ANSYS软件模拟9Cr18Mo钢圆柱形试样淬火冷却过程,得到淬火冷却曲线、残余应力随淬火时间变化曲线、残余应力沿圆柱体轴向分布曲线和试样最终轴向伸长量.分析结果表明,在热应力和组织应力的共同作用下淬火过程中试样应力状态变化复杂,最终的应力状态以组织应力为主.试样表面残余应力和试样轴向伸长的计算结果与测量结果符合的很好.     

产1,3-丙二醇新型重组大肠杆菌JM109(pHsh-dhaB-yqhD)的构建及其转化甘油

利用温控载体pHsh将编码甘油脱水酶的基因dhaB和编码1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶的基因yqhD串联构建重组质粒pHsh-dhaB-yqhD, 将其转化大肠杆菌得到新型产1,3-丙二醇重组大肠杆菌JM109(pHsh-dhaB-yqhD), 并对影响该重组菌发酵的营养因子进行研究.实验结果表明：该重组菌转化甘油合成1,3-丙二醇的适宜培养基组成为甘油60 g·L^-1、酵母膏5.0 g·L^-1、维生素B₁₂ 0.05 g·L^-1以及KH₂PO₄ 7.5 g·L^-1; 以此培养基在5 L发酵罐上进行放大, 1,3-丙二醇产量、转化率和生产能力分别达到43.26 g·L^-1、72.2 %和1.55 g·L^-1·h^-1.     

地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法

通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受性能，同时调整参数，建立了感受态细胞对质粒pAPR的高效电转化方法，当质粒DNA为1.5μg/ml、转化时电压为1750V时，可得到261个转化子，经鉴定均为阳性克隆子，此为以芽孢杆菌为宿主进行高效电转化及为建立适合工业应用的分泌型表达载体提供参考。     

具有工业应用价值的高热稳定性极端酶

主要讨论某些高热稳定性极端酶在生物工程中的重要意义及研究进展。来自嗜热及超嗜热极端微生物的极端酶在高温下显示了良好的热稳定性和活力 ,与目前工业生产中应用的酶相比 ,极端酶有其独特的生物催化功能。一些高热稳定性极端酶已经被纯化 ,它们的基因也被成功地在中温菌中克隆及表达。     

环介导等温扩增技术在鸭源成分检测中的研究

为了建立肉产品中鸭源成分的现场快速检测技术,根据动物种间特异性的原则,筛选出一对品种特异的PCR引物,在此引物扩增片段的基础上,设计了环介导等温扩增(LAMP)引物序列,能特异检测鸭源成分。通过条件优化实验,发现在25μL的扩增体系中,内外引物浓度比为1∶4,温度为63.5℃,MgSO4添加量为5 mM/μL,dNTPs添加量为1.75 mM/μL,Bst DNA聚合酶添加量为0.4 U/μL,甜菜碱添加量为0.25μmol/μL,LAMP反应时间为30 min时,LAMP检测体系检测效果达到最优,鸭肉DNA的检测灵敏度可达到10 pg/μL。对牛羊肉中鸭源成分比例的检测灵敏度为0.000 1%。应用该方法对上海市闵行区市场中的牛羊肉产品进行抽样检测,结果从21份样品中成功检测出5份含鸭源成分的混合肉。本研究建立的LAMP检测方法灵敏、快捷,可以实现鸭源成分的现场速测,为肉制品市场的监管提供了一种新方法。