高产核酸的热带假丝酵母诱变选育及其发酵条件优化

以热带假丝酵母（Candida tropicalis）HY4-17为出发菌株,采用电子束辐射技术诱变,经过初筛、复筛及遗传稳定性试验选育核酸高产菌株,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及响应面法优化培养基,并优化接种量和发酵时间以提高核酸产量。结果表明,获得一株生长快速,遗传稳定的突变菌株EBI-21,其核酸含量较出发菌株HY4-17提高了25%。最佳培养基组成为：糖蜜185 g/L,硫酸铵3 g/L,硫酸锌0.05 g/L,硫酸镁0.5 g/L,硫酸亚铁0.05 g/L,磷酸1 mL/L,pH值为4.5。在优化培养基及接种量8%,发酵时间12 h条件下,核酸产量达到1.73 g/L,较未优化前提高了80.21%,培养时间缩短了10 h。     

紫外诱变筛选高耐性低产高级醇优良啤酒酵母及其高浓发酵后啤酒风味的研究

以啤酒酵母泥X为出发菌株,经筛选,得到高耐渗,高耐酒精的酵母菌Y,并与以诱变得到高耐性低产高级醇菌株MS-5,经研究发现些菌株在高耐性发酵条件下能有效降低高级醇含量。对该菌株在28°P麦芽汁培养基中的发酵性能和发酵终止时啤酒的风味物质含量进行分析,与出发菌种X及菌株Y作对比,菌株MS-5更适合于高浓酿造。     

纤维素酶产酶菌株的选育与固态发酵

从高产纤维素酶菌株绿色木霉D-2出发,经微波诱变和紫外线辐射2种诱变方法对该菌株进行改良,经筛选获得一高产纤维素酶突变株WLZ-2,所产酶活力从207×10-7 kat/g(以干曲计)增加到296×10-7 kat/g(以干曲计);固态发酵中研究了不同麸皮稻草比例、培养基含水量、氮源种类、无机盐、表面活性剂、起始pH等因素对菌株产酶活力的影响。通过以上单因素试验和正交试验,得到优化的培养基配方为:麸皮3 g,稻草5 g,(NH4)2SO4 0.24 g,水12.8 mL。     

叶酸抗苯并[a]芘致突变作用的实验研究

目的:探讨叶酸抗苯并[a]芘致突变作用。方法:用不同浓度的叶酸(6.25、12.5、25、50μmol/L)对苯并[a]芘致鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100产生回复突变作用进行抗诱变实验。结果:不同浓度的叶酸对苯并[a]芘致TA98和TA100回复突变有抑制作用,经SPSS 17.0统计学分析,与阳性对照组比较,高剂量叶酸(25、50μmol/L)对TA98菌株抑制效果显著(P<0.05);叶酸各剂量组(6.25、12.5、25、50μmol/L)对TA100菌株均有极显著抑制效果(P<0.01)。结论:叶酸对苯并[a]芘具有抗诱变作用。     

微波结合盐酸羟铵诱变选育高产醋酸菌

以醋酸菌AFA-01为出发菌株,首先利用微波诱变菌株,之后再采用盐酸羟铵点式平板法处理,获得产酸性能较好的突变株AFA-WH3,其产酸量为7.35g/100mL,较出发菌株提高了43.55％,乙醇脱氢酶(ADH)活力达2786U/mL,较出发菌株提高94.83％.该菌株经8次传代,产酸稳定,可进行下一步的研究.     

低产乙酸啤酒酵母菌株A12的选育及中试

以啤酒酿造生产菌株啤酒酵母JM-36为出发菌株,用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变,用含浅蓝菌素的麦芽汁琼脂平板分离抗浅蓝菌素的突变株,在低温下发酵,以发酵液的乙酸、双乙酰、乙醛、高级醇、发酵度和凝聚性为筛选指标,得到1株发酵特性优良的菌株A12。以13°BX麦芽汁为培养基,用100L发酵罐在10℃下发酵14d,菌株A12发酵液的发酵度为68.2%,乙酸、双乙酰、乙醛和高级醇的含量分别为62.3mg/L、0.081mg/L、5.321mg/L和76.43mg/L。菌株A12的主要发酵特性优良且稳定,啤酒口感良好。     

西索米星生产菌株的诱变选育及工艺优化

利用原生质体常压室温等离子体（ARTP）诱变方法选育西索米星高产菌株,经诱变筛选获得一株高产菌株I4-10,其西索米星的生物效价达到1 389 U/mL,较原始菌株提高了35.4%。通过对高产菌株I4-10进行碳源、氮源优化,确定可溶性淀粉和牛肉粉是突变菌株I4-10的最适碳源和氮源。进一步采用响应面实验设计方法优化发酵培养基,结果表明黄豆饼粉和DL-蛋氨酸的添加量为显著影响因素,经优化其最适添加质量浓度分别为32.78 g/L和1.75 g/L。在此最适工艺下,西索米星的生物效价提高至1 849 U/mL,较原始菌株提高了80%。最后对原始菌及高产突变株中西索米星代谢途径及菌株生长相关的关键酶进行转录水平比较分析,初步解析了突变菌株I4-10高产西索米星的机制。     

总状毛霉紫外诱变及发酵提取壳聚糖初探

为了提高壳聚糖产量,通过对紫外诱变处理总状毛霉及发酵条件的研究,初步确定了不同发酵培养条件对总状毛霉产壳聚糖的影响,结果表明:发酵液培养基的蔗糖为50 g/L、酵母膏为2.0 g/L、硝酸钠为3.5 g/L、磷酸氢二钾为1.0 g/L、硫酸镁为0.2 g/L和硫酸铁为0.2 g/L,发酵温度控制在30℃,培养时间为48 h,壳聚糖产量为1.12 g/L。     

Structure-function analysis of tissue-type plasminogen activator by linker-insertion, point and deletion mutagenesis

We undertook a structure–function analysis of human tissueplasminogen activator (tPA) using linker-scanning and deletionmutagenesis. Synthetic oligonucleotide linkers were introducedinto the tPA cDNA at pre-existing restriction enzyme sites.This generated a series of tPA variants which contained smallprimary sequence alterations consisting of point mutations,deletions or insertions. The majority of the linker-insertionvariants demonstrate a significant reduction in amidolytic andfibrinolytic activity in comparison to wild-type tPA. The exceptionsare the variants with linker-inserts placed at the BglII(115)and StyI(277) sites of the tPA cDNA (4SLEG5 and 57LEA58 respectively),which encode insertions at the boundaries of the finger domain.The variants with linker-inserts in the light chain (proteasedomain) of tPA are the lowest in enzymatic activity. Particularlysensitive to mutation are highly conserved amino acids. Heavychain deletion variants were constructed from point mutantsat the domain boundaries of tPA. Deletion of the kringle domainslowers the fibrinolytic activity to a greater extent than deletionof the finger or growth factor domains. We conclude that alterationsin any domain of the tPA molecule, and particularly in the highlyconserved residues within these domains, can affect fibrinolyticactivity.     

天花粉蛋白突变体TCS_(KR173-174CG)的构建、表达与纯化

目的构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并进行表达及纯化。方法应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇,并进行定点突变。以栝楼基因组DNA为模板,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并对表达产物进行Ni-NTA层析纯化。结果目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白。结论已成功构建了TCS突变体基因,并获得高效表达。