黑曲霉bgl基因在毕赤酵母中的表达研究

为构建具有分泌黑曲霉β-葡萄糖苷酶活力的酵母工程菌,探讨β-葡萄糖苷酶基因(bgl基因)在酵母菌中的表达情况.克隆了黑曲霉bgl基因的cDNA片段,利用质粒pPICZαA构建了该基因的酵母表达载体,经线性化后采用电穿孔法转入毕赤酵母菌中.以甲醇为诱导物进行诱导培养,检测结果表明黑曲霉bgl基因已成功转入酵母菌中并可正常表达,重组蛋白具有β-葡萄糖苷酶水解活性,在诱导培养72 h后,发酵液的酶活力可达到0.78 U/mL.     

人源血管紧张素转化酶-N结构域基因片段在毕赤酵母中的表达

利用RT-PCR方法从食管癌细胞TE-1中反转出cDNA,PCR扩增得到血管紧张素转化酶N结构域(ACE-N)基因片段,构建pPIC9K-ACE-N表达载体,转化毕赤酵母GSll5,阳性克隆再次电转,并从转化菌株中筛选出多拷贝转化子进行表达.经Ni2+亲和层析柱对表达的蛋白进行纯化,获得的目的蛋白表达量为0.11 g/L,其纯度大于99％.为今后选择性抑制血管紧张素转化酶两个同源结构域的体外研究奠定基础.     

透性化酒精酵母细胞产海藻糖发酵培养基的优化

为提高酒精酵母细胞发酵液中海藻糖的含量,在制备出透性化酒精酵母细胞的基础上,用单因素实验和响应面分析法,优化了酒精酵母的发酵培养基,确定了最适培养基组成.实验结果表明,酵母膏、蔗糖及氯化钠的添加量对海藻糖积累影响显著,影响程度依次为:酵母膏＞蔗糖＞氯化钠.优化后的培养基组成为:酵母膏14.7 g/L,蔗糖32.5 g/...     

油脂酸价检测系统中自动滴定的实现

针对基于图像处理技术的油脂酸价自动检测系统中自动滴液部分的实现,提出了基于单片机和步进电机技术的解决方案.其中包含了串口通信技术和单片机对步进电机的控制技术,最终实现由软件控制的自动滴液过程.     

植物油制备生物柴油的研究

分别以菜籽油、大豆油以及芸香籽油为原料，采用碱催化酯交换法制备了脂肪酸甲酯即生物柴油。结果表明，用碱催化酯交换法制备脂肪酸甲酯，原料的酸价低于1．5mgKOH／g时能够保证较高的脂肪酸甲酯收率，采用酸催化预酯化法对高酸价的油脂原料进行脱酸效果比较显著。浓硫酸不仅是油脂预酯化脱酸反应的催化剂，也是油脂与甲醇进行酯交换反应的催化剂，但与甲醇钠等碱性催化剂相比，相同条件下的酯交换反应转化率低。采用减压蒸馏的方法提纯生物柴油，在0．098MPa的真空度下应控制其馏出温度不超过240℃。     

HBsAg/GM-CSF融合蛋白的克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的在毕赤酵母中表达HBsAg/GM-CSF融合蛋白。方法利用PCR扩增HBsAg和GM-CSF基因,通过15个氨基酸的连接肽将两个片段连接,获得融合基因S-GM,克隆入酵母穿梭质粒pPIC9K中。将重组质粒9K-S-GM电转化毕赤酵母后,G418筛选,甲醇诱导,HBsAg/GM-CSF融合蛋白表达。经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测表达产物特异性。结果PCR扩增的片段与预期大小一致,HBsAg/GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中获得了表达。Western blot检测,该融合蛋白同时具有HBsAg和GM-CSF的特异性。结论该融合蛋白的获得为提高乙肝疫苗的免疫原性奠定了科学基础。     

酵母废水定量表征与生物难降解相关性分析

为了分析酵母废水的常规特性以及找出生物处理酵母废水难以达标的原因,应用常规分析方法对15批次酵母废水的pH值、COD、BOD5、TN(总氮)、TP(总磷)等常规指标进行了定量表征,得到酵母废水pH值为5.26～6.53,BOD5:TN:TP为(40.3～75.6):(5.2～8.8):1,TOC:TN:TP为(31.7～66.1):(5.2～8.8):1,BOD5/COD比值在0.22～0.35,CODd(可溶性COD)占TCOD(总COD)的80%～92%,在此基础上剖析了酵母废水的生物难降解特性,得出酵母废水pH值、BOD5/COD比值不高以及碳、氮含量比值不协调等可能是导致生化处理效率不高的原因之一.     

不同总糖浓度木薯全渣乙醇分批发酵过程的研究

为研究不同初始总糖浓度对木薯全渣乙醇发酵过程中糖消耗、酵母细胞生长以及乙醇积累的影响,采取分批发酵方式,间隔6 h取样检测.结果表明：初始总糖浓度253.75 g/L时,发酵效率最高（88.93%）,乙醇生成速率、糖消耗速率、酵母数在初总糖浓度183.75 g/L时最大,分别为7.10 g/（L·h）,13.88 g/（L·h）,4.94×108个/mL;提高初始总糖浓度,糖消耗的终点时间、酵母生长到达最大值的时间、乙醇发酵时间延长,糖消耗速率、糖利用、酵母数、乙醇生成速率下降,乙醇发酵效率先升高后下降.     

过敏原肌质钙结合蛋白在毕赤酵母中的表达、优化及免疫反应性研究

目的 探究天然肌质钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium binding protein, SCP)的可替代物,为蟹类过敏原的检测提供基础材料,本研究首次利用毕赤酵母(Pichia pastoris, P. pastoris)高效表达表达三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)重要过敏原SCP,并检验其免疫反应性。方法 根据毕赤酵母的密码子偏好性优化SCP基因并构建重组质粒。将其热激转化至P. pastoris GS115菌株后经遗传霉素(Geneticin, G418)筛选获得阳性高拷贝子。最后通过甲醇诱导表达重组SCP并结合免疫印记(Western blotting, WB)和间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)验证其免疫反应性。结果 SCP在P. pastoris GS115中实现了可溶性高效表达,其表观分子量约为28 kDa。在摇瓶水平下,最佳诱导条件为pH为6.0、每24 h添加1.0%(v/v)甲醇,于28℃发酵144 h,在此条件下,纯度为91.6%的SCP产量可达15 mg/L。WB和间接ELISA结果表明,重组SCP具有IgG结合能力。结论 毕赤酵母表达系统可以得到纯度较高且免疫反应性良好的重组SCP。本研究为SCP的理化研究及产业化应用奠定了基础,并有望促进特异性甲壳类过敏原检测的发展。     

新型国产近红外分析仪的菜籽菜粕快速检测技术研究

近红外光谱分析作为1种快速无损的绿色分析技术,可应用于检测油料原料和油脂产品品质,为粮油企业带来巨大经济效益.本文采用一款新型国产化的近红外漫反射光谱分析仪对菜籽和菜粕进行了检测分析,分别对菜籽的水分、蛋白、含油量、脂肪酸、硫苷含量和菜粕水分、蛋白和含油量指标建立模型并验证.结果显示近红外检测结果与国标参考方法检测结果相关性好、准确度高.表明新型国产化的近红外分析仪可满足油脂企业对菜籽和菜粕产品的质量控制要求.