budR表达水平对克雷伯氏菌甘油代谢的影响

通过过量表达和反义RNA抑制改变budR表达水平,考察budR表达水平对克雷伯氏菌甘油代谢的影响。过表达budR使得Bud B和Bud C的酶活提高了48.7%和69.7%,1,3-丙二醇产量降低了12.6%,2,3-丁二醇含量增加了73.3%,同时乙酸含量显著降低。反义RNA抑制budR表达后,Bud B和Bud C酶活分别降低了56%和78%,重组菌的生物量、2,3-丁二醇(BDO)、乙酸、乳酸等均表现为略有降低,1,3-丙二醇含量达到23.4g/L,提高约10%。上述结果进一步丰富了budR基因在调控bud操纵子的表达水平、2,3-丁二醇合成及克雷伯氏菌甘油代谢中的作用,为后续代谢改造克雷伯氏菌合成1,3-丙二醇提供了新的思路。     

子宫内膜腺癌中MMP-2、MMP-9表达的免疫组化研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-2、-9(Matrix metalloproteinases,MMP)在子宫内膜腺癌组织中的表达及其与临床病理关系。方法:应用免疫组化SP法检测MMP-2、MMP-9在不同子宫内膜组织中的表达情况。结果:MMP-2在正常子宫内膜、子宫内膜增生症和子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率分别为15.0%、26.7%、88.0%,MMP-9的阳性表达率分别为25.0%、33.3%、95.0%,MMP-2和MMP-9的表达在子宫内膜腺癌中均明显高于正常子宫内膜、子宫内膜增生症,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。MMP-2、MMP-9的表达强度与子宫内膜腺癌的手术-病理分期、组织学分级、肌层浸润和淋巴结转移相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MMP-2、MMP-9在子宫内膜腺癌的发生、发展过程中起促进作用,且两者表达与子宫内膜腺癌的浸润深度和转移程度有关,为早期诊断子宫内膜腺癌以及子宫内膜腺癌的预后判断、靶向治疗提供了可靠的依据。     

孕早期血清P、E_2监测与妊娠结局相关性的研究

目的探讨孕早期血清P、E2值的变化与妊娠结局的相关性。方法选择201505-201712月在我院确诊为早孕的妇女465例,随访至孕12周末。采用化学发光分析法检测血清P、E2。根据妊娠结局及临床症状分为正常妊娠组及异常妊娠组。结果 (1)正常妊娠组孕酮水平与孕周无相关性(P>0.05)。妊娠4⁷周异常妊娠组血清孕酮水平均低于正常妊娠组(P均<0.05),但妊娠8周后2组间孕酮水平比较下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。当P值低于10 ng/m L时,妊娠失败流产比例高。(2)正常妊娠组每周血清E2水平与妊娠周数呈正相关(P<0.05)。异常妊娠组孕妇血清E2水平低于相应孕周正常早期妊娠组孕妇,差异有统计学意义(P<0.05)。结论动态检测孕早期血清P、E2可以为临床医师治疗方案的选择提供参考。     

黄酒发酵过程中乳酸菌的分离及对其产生物胺能力的评价

对黄酒酿造过程中乳酸菌进行分离,并对乳酸菌产生物胺能力进行检测。利用脱羧培养基对分离出的82株乳酸菌进行培养,结合反相高效液相色谱技术(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RPHPLC)测定发酵液中生物胺含量,具体色谱条件如下:使用丹磺酰氯(Dansyl Chloride,Dns-CL)进行柱前衍生,以乙腈-乙腈(φ=50%)为流动相梯度洗脱,流速1.0 m L/min,254 nm紫外波检测。该方法在给定浓度范围内线性关系良好(R~20.996),平均回收率为94.46%~105.20%,相对偏差(RSD)均小于5%。检测到组胺产生菌株11株,最大生成量为18.19 mg/L,高产菌株分离自黄酒前酵第2天;酪胺产生菌株28株,最大生成量为30.38mg/L,高产菌株分离自黄酒前酵第2天;腐胺产生菌株51株,最大生成量为299.94 mg/L,高产菌株分离自浸米水。由此表明,有必要控制黄酒发酵过程中的乳酸菌,采用低产或不产生物胺的乳酸菌作为强化菌株,可降低黄酒中的生物胺含量。     

高产精氨酸的钝齿棒杆菌在高低供氧条件下的差异蛋白质组学初步研究

溶氧水平直接影响钝齿棒杆菌合成精氨酸产量的高低,运用双向电泳结合MALDI-TOF-MS及MS/MS质谱鉴定技术的方法对高低供氧条件下高产精氨酸的钝齿棒杆菌的胞内可溶性蛋白进行分离鉴定.结果表明,钝齿棒杆菌菌体蛋白的等电点主要分布在4-7的范围内,采用pH4-7的IPG胶条进行分离,得到了645±12个蛋白点.通过软件...     

大肠杆菌中芥蓝抗坏血酸过氧化物酶基因的高效表达

将芥蓝抗坏血酸过氧化物酶(Apx)在大肠杆菌中高效表达。以芸薹属植物apx保守区基因序列为基础,利用PCR,RACE技术从芥蓝中扩增得到全长为753 bp的芥蓝apx编码基因,用DNAMAN V6软件分析该基因氨基酸组成,计算出蛋白分子质量约为27.6 kDa。通过构建重组质粒pET-28a-apx,转化大肠杆菌E.coli BL21,实现了芥蓝Apx的可溶性表达。通过单因素实验优化诱导表达条件,结果表明:0.2 mmol/L IPTG,23℃诱导培养10 h为最佳诱导条件。采用Ni2+亲和层析,纯化了重组蛋白,并得到重组酶最适反应条件为pH 6.5和40℃。为进一步研究Apx的生理特性和功能打下基础。     

应用MATLAB优化十五碳二元酸发酵培养基

为提高十五碳二元酸(DC15)产量,利用均匀设计法考察DC15发酵培养基组分尿素、乙酸钠、磷酸二氢钾对DC15发酵的影响,并利用MATLAB 7.1的逐步回归函数(stepwise)、多元线性回归函(regress)、二次规划优化函数(quadprog)等分析数据,得到最佳组合(W/V):尿素0.05%,乙酸钠0.37%,磷酸二氢钾0.91%.实验结果表明,采用优化后的培养基,DC15产量达到29.54 g/L,比初始培养基条件下22.04 g/.L提高了34%.     

微生物发酵生产C_4二元羧酸研究进展

C4二元羧酸(苹果酸、延胡索酸和琥珀酸等)是TCA循环中重要的中间代谢产物,广泛用于食品、医药和化工等行业。由于市场潜在需求量巨大,微生物发酵法生产C4二元羧酸备受关注。从自然界筛选的微生物可以大量积累C4二元羧酸,但存在诸多问题。而利用模式微生物生产C4二元羧酸具有很多优势,已成为国内外的研究热点。从三个方面综述了C4二元羧酸的研究进展:利用自然筛选及改造的微生物生产C4二元羧酸,代谢工程改造模式微生物生产C4二元羧酸,C4二元羧酸的发酵生产的代谢调控。最后,提出了微生物发酵法生产C4二元羧酸今后要解决的问题和发展方向。     

比较基因组分析Yarrowia lipolytica BBE-17的赤藓糖醇合成机制

Yarrowia lipolytica BBE-17是一种野生型非模式菌,可发酵生产赤藓糖醇,具有潜在的工业应用价值。我们将菌株BBE-17与模式菌株CLIB122进行了比较基因组分析,探究其赤藓糖醇积累的可能机制,揭示了BBE-17中43921个单核苷酸多态性(SNPs),8078个小片段插入和缺失。此外,与参考基因组相比,发现了129个基因组结构变异和142个覆盖六条染色体的DNA拷贝数变异。在这些变异中,与赤藓糖醇合成有关的途径基因只有TKL1和ER,分别发生了1个单核苷酸多态性变化,并且只导致1个氨基酸发生改变,表明这两个基因中的SNP不是造成赤藓糖醇积累的主要原因,而BBE-17中大量的缺失型基因组变化可能是代谢网络改变的主要原因,也可能是靶向代谢途径增强和赤藓糖醇积累的主要原因。在基因组层面全局揭示了BBE-17与CLIB122的差异,探寻其积累赤藓糖醇的机制,为进一步优化改造亚罗解脂酵母生产赤藓糖醇提供了思路和理论依据。     

杏鲍菇菌渣产漆酶及其在染料脱色中的应用

以杏鲍菇菌渣为原料,探讨了其固态发酵产漆酶的条件,并对粗酶液在染料脱色中的应用进行了初步探索。结果表明,当添加质量分数4%甘蔗渣、质量分数1.2%硝酸铵、质量分数1.0%碱木素时,杏鲍菇菌渣产酶能力最强,达到386.9 U/gds。相对于杏鲍菇菌渣初始漆酶酶活18.6 U/gds,优化后提高了20倍以上。最适条件下,发酵粗酶液在无介体存在下对甲基红、活性艳蓝K3R、酸性蓝209、活性艳蓝KNR的脱色率分别达到85.8%、85.6%、68.3%、71.2%,在添加介体的条件下活性艳蓝K3R、酸性蓝209、活性艳蓝KNR的脱色率分别达到88.8%、93.4%、89.7%。显示出杏鲍菇菌渣漆酶良好的环保应用前景。