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将来源于解脂嗜热互营杆菌(Thermosyntropha lipolytica)的脂肪酶(TlLipA)基因tll1导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过热处理和镍柱亲和层析获得纯酶,并对其酶学性质进行研究。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示TlLipA分子量为53×103,其最适反应温度为65℃,最适反应pH为8.0。在55~65℃范围内酶活较高且比较稳定;在pH7.0~11.0于室温保存1 h后,残留相对酶活仍达80%以上。1 mmol/L 金属离子Zn2+、Fe3+和试剂SDS,0.05%(质量分数)Tween 80,对酶活力具有强烈的抑制作用,残留相对酶活皆低于15%;1 mmol/L Mg2+、Mn2+对酶活力表现出轻微的激活作用。由底物专一性实验可得,该酶对辛酸对硝基苯酯(C8)和癸酸对硝基苯酯(C10)偏好明显。以棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)为底物,该酶动力学参数Km值为0.23 mmol/L,Vmax为33.50 mmol/(L·min),kcat为22.83 S-1。以重组脂肪酶为催化剂在无溶剂体系中制备生物柴油,含水率20%,酶加量200 U/g油,醇油比为4∶1的条件下,在55℃催化大豆油反应48 h,收率可达91.75%。 相似文献
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《Planning》2015,(8)
笔者从事语文教学多年,总感到语文教学所花费的时间精力与教学效果不成正比,学生的学习效果没有达到预期目标。实施新课程改革以来,小学语文课堂教学发生了不小的变化,如何让教学更有效,使学生获得更多的知识和能力,便成了广大语文教师探讨的重要问题。 相似文献
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