乳菇菌素D体外抗肿瘤活性及对细胞周期和凋亡的影响

目的：研究来源于绒白乳菇菌的新型倍半萜类化合物——乳菇菌素D的抗肿瘤活性及对细胞周期和细胞凋 亡的影响。方法：运用噻唑蓝法检测乳菇菌素D对A549、HCT-8、Bel-7402、SMMC7721、HeLa细胞增殖的抑制作 用并计算半数抑制率（half maximal inhibitory concentration,IC50）,并以顺铂作为阳性对照;选择对该化合物敏感 的A549细胞株,观察其作用后细胞的形态学改变、细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果：乳菇菌素D能够有效抑制 A549、Bel-7402、SMMC7721和HeLa细胞的增殖,作用72 h后的IC50分别为2.46、19.09、18.21、17.05 μg/mL;乳菇 菌素D可引起A549细胞显著的形态学改变,出现凋亡小体;诱导A549细胞凋亡（100 μg/mL作用72 h 时的凋亡率为 32.14%）、使细胞阻滞于S期。结论：该化合物能够抑制多种组织来源的肿瘤细胞增殖,其中A549细胞最敏感;其 作用机制是通过干扰细胞增殖周期而诱导肿瘤细胞凋亡。本实验为乳菇菌素D的开发提供实验依据。     

苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI) 荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明：苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100 μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%, 而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为 3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。     

马齿苋总黄酮对血小板源性生长因子致家兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的: 研究马齿苋总黄酮(Portulaca total flavone,PTF)对血小板源性生长因子-BB型(PDGF-BB)致血管平滑肌细胞(Vascular smoothmuscle cell,VSMC)增殖的影响并探讨其机制。方法: 采用组织贴壁法培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞计数法观察PTF(8、24、72 mg/L)对PDGF-BB所致的VSMC增殖作用的影响;氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入方法测定VSMC DNA的合成;流式细胞仪分析增殖细胞周期,荧光分光光度计测定VSMC内 [Ca²⁺]_i。结果: PTF以浓度依赖方式抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖、DNA合成,血管平滑肌细胞处于G₁/G₀ 期的细胞数增多,而G₂/S期的细胞数显著减少(P<0.01);能抑制高K⁺诱导的VSMC内[Ca²⁺]_i升高(P<0.01)。结论: PTF可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用机制可能与其降低VSMC内高钙浓度[Ca²⁺]_i有关。     

代代花总黄酮对3T3-L1细胞增殖活性的影响

本文研究了代代花总黄酮抑制3T3-L1细胞增殖及诱导其凋亡的作用。不同浓度的代代花总黄酮作用于3T3-L1细胞24 h之后,采用MTT法检测代代花总黄酮对细胞增殖的抑制作用;使用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;Annexin V-EGFP/PI标记检测细胞凋亡率;PI标记法检测了代代花总黄酮对细胞周期的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平;荧光定量PCR检测了凋亡相关基因的m RNA水平表达。结果表明,高浓度(300μg/m L和400μg/m L)的代代花总黄酮可显著抑制3T3-L1细胞增殖,细胞的抑制率分别为38%和63%,且细胞形态发生了明显变化,并显著升高了细胞内ROS浓度。细胞凋亡实验结果显示,代代花总黄酮可诱导3T3-L1细胞早期凋亡和晚期凋亡,100μg/m L、200μg/m L和300μg/m L代代花总黄酮处理组的细胞早期凋亡率分别为4.6%、15.7%和22.5%;晚期凋亡率分别为14.4%、8.3%和32.2%。而细胞周期实验则表明,处理后3T3-L1细胞G0/G1期细胞数比例从58.9%下降到51.4%,而相应的S期细胞数比例呈小幅度增加,G2/M期细胞数比例变化不明显。凋亡相关基因p21及p53的m RNA表达明显升高及促凋亡基因bax与抗凋亡基因bcl-2比例的升高使3T3-L1进入细胞凋亡程序。     

心血管疾病中血管平滑肌细胞增殖与药物开发

血管平滑肌细胞增殖在高血压、动脉粥样硬化、再狭窄等心血管疾病的发生、发展中起着重要的作用。本文对血管平滑肌细胞胞外调控因素、胞内信号传导、细胞周期的研究现状及基于此三方面的药物研发进行综述。     

双氢青蒿素对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的影响

目的:探讨双氢青蒿素对小鼠Lewis 肺癌移植瘤的抑瘤效应及其作用机制。方法:50只C57BL/6J 小鼠皮下接种3LL 细胞(2×10⁶), 随机分为5组, 分别为生理盐水组, 阳性对照顺铂组,双氢青蒿素高、中、低剂量组(150、100、50 mg/kg),检测各组小鼠的体重变化和抑瘤率, 应用流式细胞术进行瘤细胞的DNA 倍体分析。结果:双氢青蒿素中、高剂量组体重无生理盐水组增加明显, 其抑瘤率分别为53.50%及59.24%;流式细胞术检测双氢青蒿素能诱导肿瘤细胞凋亡, 并能影响肿瘤的细胞周期, G0G 期及G₂/M 期细胞数大量减少, 细胞被阻滞在S1期。结论:口服双氢青蒿素对Lewis 小鼠肺癌有明显的抑制作用, 可促进肿瘤细胞凋亡。     

低剂量~(12)C~(6+)离子辐照对小鼠胸腺、脾脏细胞周期及DNA损伤的影响

研究低剂量12C6+子全身辐照对小鼠胸腺、脾脏细胞周期进程及DNA损伤的影响.以0、10、50、75、100和250mGy 12C6+离子全身辐照小鼠,照射后6h处死小鼠,用流式细胞仪检测受辐照小鼠胸腺、脾脏细胞在各细胞周期的百分率,用彗星电泳技术检测受辐照小鼠胸腺脾脏细胞的拖尾率和拖尾长度.所有照射组G0/G1期胸腺细胞百分率明显低于对照组,(p<0.05),10～100mGy照射组S期胸腺细胞百分率显著高于对照组(p<0.01),所有照射组(G2/M)期胸腺细胞百分率明显高于对照组(p<0.05);所有照射组G0/G1期脾细胞百分率明显高于对照组(p<0.01),S期脾细胞百分率显著低于对照组(p<0.05).彗星电泳结果显示低剂量12C6+离子辐照以剂量依赖的方式引起小鼠胸腺脾脏细胞DNA迁移长度及拖尾率的增加.低剂量的碳离子辐射可促进小鼠胸腺细胞DNA合成,对小鼠脾脏细胞产生抑制作用,使其发生G1期阻滞;同时对胸腺及脾脏细胞造成具有明显剂量效应关系的DNA损伤.     

枸杞多糖促进大鼠肝癌组织细胞的凋亡

为探究枸杞多糖对肝癌模型大鼠癌组织细胞凋亡的干预效果及作用机制。选取45只SD健康雄性大鼠,5只作为正常组,其余40只建立肝癌模型,分为模型组、药物对照组、低、高浓度组,并分别进行干预。观察各组大鼠细胞增殖、凋亡、周期分布情况,检测PTEN、p-Akt、m TOR、Bcl-2、Bax、caspase3表达。研究结果显示,高浓度组G1期细胞比例为57.59%,高于模型组、药物对照组、低浓度组(p<0.05)。高浓度组大鼠增殖率为8.53%,凋亡率为47.68%,均优于模型组、药物对照组和低浓度组。高浓度组大鼠PTEN相对表达量为0.98,p-Akt、m TOR相对表达量分别为1.05、1.11,高浓度组大鼠Bcl-2、caspase3相对表达量分别为1.26、1.19,Bax相对表达量为0.98,干预效果均优于药物对照组和低浓度组(p<0.05)。实验结果表明,在枸杞多糖的干预下,肝癌大鼠癌组织肿瘤细胞增殖、凋亡及周期分布受到明显调控,PTEN、p-Akt、m TOR、Bcl-2、caspase3、Bax表达受到明显的调控,说明枸杞多糖能够阻滞肝癌组织细胞周期分布,抑制肝癌组织细胞增殖,促进细胞凋亡,为肝癌的临床治疗提供一定的理论依据。     

高纯度哌柏西利合成工艺研究

哌柏西利是一种细胞周期蛋白依赖性激酶4和6(CDK4/6)的抑制剂，用于治疗绝经后妇女的晚期/转移性乳腺癌。以4-[6-[(6-溴-8-环戊基-7,8-二氢-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-D]嘧啶-2-基)氨基]-3-吡啶基]-1-哌嗪羧酸叔丁酯为原料，经Heck偶联、醚键水解、脱Boc保护基、碱性游离4步合成哌柏西利，总收率为71%，产品纯度达99.9%。产品结构经核磁共振氢谱1H NMR和高分辨质谱确证。该工艺原料易得，操作简便，收率较高，产品纯度高，适合工业化生产。     

神经肽P物质对放射损伤皮肤成纤维细胞周期及凋亡的影响

为探讨神经肽P物质(substance P,SP)对放射损伤皮肤成纤维细胞凋亡及周期的影响,将人皮肤成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFF-1)分为0 Gy组(对照组)和12 Gy组、18 Gy组、12 Gy+SP组、18 Gy+SP组4个实验组。实验组经12 Gy、18 Gy的电子束照射,其中12 Gy+SP组、18 Gy+SP组于照射前1 h给予10^-7 mol/L SP干预。照射后48 h,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax表达情况。细胞周期检测显示,与0 Gy组相比,12 Gy和18 Gy组细胞G₂期百分比显著增加;18 Gy+SP组与18 Gy组相比,细胞G₂期百分比显著降低。细胞凋亡检测显示,与0 Gy组相比,12 Gy和18 Gy组细胞凋亡率显著升高;SP干预组(12 Gy+SP组、18 Gy+SP组)较照射组(12 Gy组、18 Gy组)的细胞凋亡率显著降低。实时荧光定量PCR对Bcl-2和Bax表达检测显示,与0 Gy组相比,12 Gy和18 Gy照射组细胞Bax基因表达显著升高,Bcl-2基因表达显著降低;SP干预组(12 Gy+SP组、18 Gy+SP组)较照射组(12 Gy组、18 Gy组),Bcl-2基因表达显著升高,Bax基因表达差异不显著。上述结果揭示,电子束照射可诱发人皮肤成纤维细胞的凋亡及细胞G₂期阻滞;SP可抑制放射损伤人皮肤成纤维细胞的凋亡及G₂期阻滞。