大肠杆菌一面包酵母种间耦合ATP再生系统中生物合成谷胱甘肽

利用混合悬浮培养的方法，构建了一个由重组大肠杆菌的谷胱甘肽生物合成酶系与面包酵母的糖酵解途径组成的ＡＴＰ再生系统，验证了该系统用于谷胱甘肽（ＧＳＨ）生物合成的可行性。研究了葡萄糖浓度、细胞量对耦合系统合成ＧＨＳ能力的影响，讨论了所构建的ＡＴＰ再生系统的ＧＳＨ合成能力较低的可能原因。     

黄孢原毛平革菌产蛋白酶对过氧化物酶的影响

在培养黄孢原毛平革菌产生木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)过程中产生的胞外蛋白酶与LiP和MnP的快速失活有关.该蛋白酶在pH 7的条件下酶活很高,其主要作用是促进LiP和MnP的分解,而不是抑制它们的产生.HgCl2是蛋白酶的抑制剂,其抑制机理类似于HgCl2对蛋白酶K(PK)的抑制.添加HgCl2的发酵液能提高过氧化物酶的酶活和稳定性,最佳添加量为1 μmol/L,最佳添加时间在接种后第5天.     

聚γ-谷氨酸高产突变株的选育及摇瓶发酵条件

对地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)进行亚硝基胍和^60Co诱变，获得一株)γ-PGA的高产菌株C9．γ-PGA质量浓度由9．44g／L提高到19．76g／L，提高了109％．突变株传代10次，质量浓度保持基本稳定．通过正交试验和单因素试验对发酵培养基及发酵条件进行了优化．当发酵培养基中含柠檬酸12g／L、甘油80g／L、L-谷氨酸23g／L、氯化铵7g／L，pH7．0，装液量为50mL／250mL三角瓶。接种体积分数为5％时。37℃摇瓶发酵72h。γ-PGA达到23．32g／L。     

双孢菇深层发酵培养基的响应面优化

研究了碳源、氮源、无机盐对双孢菇胞外多糖产量的影响.在单因素实验的基础上,采用响应面实验设计对双孢菇(Agaricus bisporus)深层发酵生产胞外多糖的培养基进行了优化,并建立了葡萄糖、KH2PO4、蛋白胨变化的二次回归方程,探讨了各因子对胞外多糖产量的影响.最终确定适宜的培养基条件为葡萄糖35.7g/L,KH2PO42.1g/L,蛋白胨3.1g/L;在此条件下可得到胞外多糖的最大产量,预测值为1.86g/L,对实验结果进行验证,得到胞外多糖的产量为1.87g/L.     

谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质

茂原链轮丝菌Streptoverticilliummobaraense所产生的谷氨酰胺转胺酶发酵液通过抽滤、超滤、乙醇沉淀、离心和冷冻干燥,制得粗酶粉的酶活约为1033U/g.对粗酶研究发现,该酶的最适反应温度为52℃,最适pH为6.0;粗酶的pH稳定范围在4～8,温度稳定范围在20～40℃,离子强度对该酶的活性稍有影响.粗酶经CM 纤维素层析和SephadexG 75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检验蛋白质纯度,得到较弱的单一区带.其中,CM 纤维素层析的纯化倍数为4.5,收率质量分数约为78.8%;凝胶过滤层析纯化倍数为1.11,收率质量分数为50%;用凝胶过滤法测得谷氨酰胺转胺酶的相对分子质量为40092.     

嗜热古菌Thermococcus sp.HJ21产高温普鲁兰酶条件和酶学性质

对一株分离自热液口的超嗜热古菌(Thermococcus sp. HJ21)菌株产普鲁兰酶的条件及酶学性质进行了研究.结果发现:该菌株在18 h产酶量达到最高.在发酵温度为88 ℃、培养基初始pH 6.5,以及NaCl质量浓度为2.5 g/dL时,产酶较高.麦芽糖、酵母粉和蛋白胨有利于普鲁兰酶的产生.该酶的最适作用温度为95 ℃,在80～100 ℃之间仍可保持较高的酶活性;该酶具有较好的热稳定性,100 ℃保温2 h,仍有50%以上的残余酶活.该酶的最适作用pH为6.0,并且在pH 5.0～7.0之间可以保持较高酶活性;在pH 5.0～7.0之间较稳定,在pH 6.5时稳定性最好.Ca2+和Na+对普鲁兰酶具有较强的激活作用,而Al3+、Ni2+、Hg2+、Cu2+等则强烈抑制酶的活性.     

E.coli M15 (pQTPL)高效发酵生产酪氨酸酚裂解酶的控制策略

在摇瓶和4 L发酵罐上研究了营养和环境条件对重组菌E. coli M15 (pQTPL)分批发酵生产酪氨酸酚裂解酶(TPL)的影响. 在培养基中添加20 g/L葡萄糖和1.0 g/L玉米浆使TPL酶活提高到63.1 U/g(干重). 在此基础上,维持发酵液中溶氧水平为30%,可使菌体浓度在8 h达到4.78 g/L,酶活为54.6 U/g,比对照组(不控制溶氧)分别提高了21%和31.6%. 采用溶氧反馈调节-限制性补料策略,可使菌体浓度提高到31.5 g/L. 采用两阶段温度和pH控制策略,在发酵前8 h控制pH 7.0、温度37℃,8 h 至发酵结束之间控制pH为8.0、温度为30℃,可使重组菌的TPL酶活达到154.4 U/g,并使TPL在细胞中过量表达,实现了高菌体浓度和高TPL酶活的统一.     

凝血因子VII高表达细胞的高通量筛选方法

针对哺乳动物细胞表达克隆的耗时较长的筛选过程,作者通过流式细胞仪对细胞进行快速筛选和纯度检测。利用流式细胞仪对电转细胞进行分选,利用点杂交和western blot方法筛选高表达克隆。流式细胞仪分选后的细胞,经点杂交和WB检测后获得的CHO-r FVII-1细胞,表达r FVII细胞的比例为99.9%,同时与传统筛选方法获得的CHO-r FVII克隆比较后发现,两株细胞具有相同的r FVII产量。作者基于流式细胞仪建立了快速筛选高表达重组药物蛋白克隆的筛选的高通量方法和纯度检测的方法,为其他在哺乳动物细胞中表达重组蛋白的筛选提供参考。     

两株假单胞菌对烷烃的摄取和降解

根据细菌在油水混合体系中的分布差异,从江苏油田附近污染的土样中筛选得到了两株对烷烃具有降解能力的假单胞菌Pseudomonas sp. A和Pseudomonas sp. B. 在以煤油为唯一碳源的培养基中,Pseudomonas sp. A的生长量较低,菌体主要聚集在油相中,菌体细胞呈亲油性,生长几乎不受生物表面活性剂抑制剂EDTA的影响,菌体的生长对培养基的表面张力的降低幅度较小;而Pseudomonas sp. B则表现相反的性质. 说明两菌株对烷烃具有不同的摄取机制,Pseudomonas sp. A是以直接接触烷烃的方式摄取,而Pseudomonas sp. B则是通过产生生物表面活性剂对烷烃进行乳化后再摄取.     

植物乳杆菌中胆盐水解酶的研究现状及展望

益生菌的降胆固醇作用与它们所产的胆盐水解酶(bile salt hydrolase,BSH)有关,这使得胆盐水解酶成为近年来研究的热点之一。文中主要对植物乳杆菌中胆盐水解酶的克隆表达、生化特性以及降胆固醇作用等方面的研究现状进行了综述,并展望了它未来的发展方向。以期对植物乳杆菌胆盐水解酶的研究及其相关制品的开发利用提供一定的指导意义。