黄孢原毛平革菌产蛋白酶对过氧化物酶的影响

在培养黄孢原毛平革菌产生木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)过程中产生的胞外蛋白酶与LiP和MnP的快速失活有关，该蛋白酶在pH7的条件下酶活很高，其主要作用是促进LiP和MnP的分解，而不是抑制它们的产生，HgCl2是蛋白酶的抑制剂，其抑制机理类似于HgCl2对蛋白酶K(PK)的抑制，添加HgCl2的发酵液能提高过氧化物酶的酶活和稳定性，最佳添加量为1μmol／L，最佳添加时间在接种后第5天。     

黄孢原毛平革菌选择性合成木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶

在黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)的限氮浸没式培养中，研究了不同条件对选择性合成木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)的作用. LiP只在很窄的氮源浓度范围内(0.8~1.8 mmol/L)才能测到，而MnP在较宽浓度范围内(0.4~1.8 mmol/L)表现出较高的酶活水平. 培养基中缺乏Mn2+不能合成MnP，但可以得到活力较高的LiP. [Mn2+]在0.06~0.84 mmol/L时可获得LiP. 添加微量Mn2+即可获得较高活力的MnP，此后增加Mn2+对MnP的活力影响不大，直至浓度为3.36 mmol/L才表现出明显的抑制作用. 通纯氧可使LiP活力提高50%，但对MnP影响不大.     

曝气式反应器中木质素过氧化物酶的合成及对印染废水配制液的脱色处理

比较了黄孢原毛平革菌在3种生物反应器(搅拌式反应器、鼓泡式反应器、曝气式反应器)中合成木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)的差异. 结果表明，曝气式反应器对酶的合成(尤其是LiP)最为有利. 考察了曝气式反应器中半连续培养和连续培养两种方式下酶的合成和橙I脱色情况，发现半连续培养可使培养体系长时间保持较高酶活力，置换比例为1/2时染料废水可连续脱色5批，脱色率达到90%以上，比脱色率在46.7 g/(g×d)以上. 连续培养条件下酶很快失活，废水的脱色率迅速下降. 在曝气式反应器中用半连续培养的方式(置换比例1/2)对实际印染废水进行处理，可处理废水4批，前3批脱色率达到90%以上，第4批有明显下降.     

大肠杆菌—面包酵母种间耦合ATP再生系统中生物合成谷胱甘肽

利用混合悬浮培养的方法,构建了一个由重组大肠杆菌的谷胱甘肽生物合成酶系与面包酵母的糖酵解途径组成的ＡＴＰ再生系统,验证了该系统用于谷胱甘肽（ＧＳＨ）生物合成的可行性．研究了葡萄糖浓度、细胞量对耦合系统合成ＧＳＨ 能力的影响,讨论了所构建的ＡＴＰ再生系统中ＧＳＨ 合成能力较低的可能原因．     

白酒难挥发组分中呈苦味三羟基十八烯酸的分离与鉴定

白酒难挥发组分对白酒的风味品质具有重要的影响。采用滋味稀释分析技术(taste dilution analysis,TDA)结合仪器分析了酱香型白酒难挥发组分中的呈味化合物。以TDA感官强度为导向,结合固相萃取和多级高效液相色谱分离,从酱香型白酒难挥发组分中筛选并分离出3个关键呈味组分。进一步采用高分辨质谱和核磁共振技术解析了这些组分的化学结构,首次在白酒中鉴定出具有苦味特征的化合物9,10,13-三羟基-11(E)-十八烯酸(1)和9,12,13-三羟基-10(E)-十八烯酸(2)。基于超高效液相色谱串联三重四极杆技术建立了这2种三羟基十八烯酸在白酒中的精确定量方法。分析了它们在不同香型白酒样品中的含量,发现化合物1和2在酱香、浓香和清香型酒样中(共6种)均存在,质量浓度范围分别为1. 8~265. 3和2. 2~111. 3μg/L,并且它们在酱香型酒样中浓度显著高于其他2种香型(p 0. 01)。     

共表达蛋白质折叠辅助因子对毕赤酵母分泌表达IFNβ-HSA融合蛋白质的影响

探索共表达蛋白质折叠辅助因子Ero1、PDI和Bi P对毕赤酵母GS115分泌表达融合蛋白质IFNβ-HSA的影响。将构建的蛋白质折叠辅助因子表达载体p GAP-Ero1、p GAP-PDI、p GAPBi P和空载对照线性化后,电击转化重组毕赤酵母GS115/IFNβ-HSA细胞,用含有400μg/m L zeocin的YPD平板筛选阳性转化子,并采用PCR和Western blot法进一步鉴定。阳性转化子进行摇瓶发酵后,采用SDS-PAGE及Western blot法分析共表达Ero1、PDI和Bi P对IFNβ-HSA表达水平的影响。结果表明,Ero1、PDI和Bi P成功地在胞内过量表达,且不影响宿主细胞的正常生长;共表达Ero1和PDI分别使IFNβ-HSA的表达量提高了80%和90%,而共表达Bi P则对IFNβ-HSA的表达水平无明显影响。     

EDTA对木质素过氧化物酶在染料脱色中的影响

在反应液中含 2mmol/LEDTA时 ,2 4h后染料甲基橙的脱色率比未加EDTA的下降约70 % .添加 2mmol/LEDTA明显地抑制了木质素过氧化物酶 (LiP)对多种染料的脱色 .酶动力学研究表明 :EDTA对LiP的抑制属非竞争性抑制 .添加比EDTA稍大量的Zn2 + 能解除EDTA对LiP的抑制 ,其他多种金属离子也能减轻EDTA的抑制作用 .     

CHO细胞Kcmf1基因内定点整合ZsGreen1报告基因的表达稳定性研究

以Kcmf1基因NW_003614172.1第629890碱基处定点整合ZsGreen1报告基因的CHO-K1细胞(2C3)为研究材料,采用倒置荧光显微镜和流式细胞仪定量分析ZsGreen1的表达,开展系统的稳定性表达研究。2C3细胞贴壁培养连续传代50代次,100%的细胞可以稳定表达ZsGreen1报告基因。无血清悬浮驯化培养2C3细胞后,细胞表达ZsGreen1的平均荧光强度明显降低;连续悬浮传代培养60代次,表达ZsGreen1的细胞数目显著增多,添加体积分数10%FBS到悬浮培养的细胞池,ZsGreen1阳性细胞比例上升到95%以上。流式细胞术分选细胞池中高、低表达ZsGreen1蛋白的2C3细胞,PCR确认它们均含有ZsGreen1报告基因;Q-PCR发现在高、低表达ZsGreen1蛋白的细胞中,相关的ZsGreen1 mRNA水平有明显的差异。提示CHO-K1细胞Kcmf1基因内非编码区域定点整合外源基因后,不会因细胞分裂和生长而丢失外源表达基因;悬浮驯化需要优化培养基和培育条件,达到构建工程细胞的需求。     

提高重组毕赤酵母表达hIFNb-HSA的碳源控制策略

研究了重组毕赤酵母KM71/IH菌体生长阶段饥饿培养对其细胞相对活性及人b干扰素-血清白蛋白融合蛋白(hIFNb-HSA)表达的影响. 结果表明，在以甘油为唯一碳源的细胞培养后期进行饥饿培养以耗尽培养基中的甘油会导致重组细胞相对活性的降低，进而减少hIFNb-HSA的表达量. 在此基础上，提出了菌体培养后期，即过渡阶段流加甘露醇碳源代替饥饿培养的策略，不仅可以消除培养液中甘油残留对甲醇诱导表达hIFNb-HSA的不利影响，而且能够保持重组细胞培养物较高的相对活性(>97%)，从而可以提高甲醇诱导表达hIFNb-HSA的水平，表达量可达37.3 mg/L，最大生产强度为0.78 mg/(L×h)，较对照分别提高了92.3%和44.4%.     

黄孢原毛平革菌合成的木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶及其菌球在染料脱色过程中的作用

在黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)限氮浸没式培养中，获得了含木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)、只含LiP或MnP以及无LiP和MnP的4种培养物，考察了LiP，MnP及菌球在染料脱色过程中的作用. 结果表明，4种培养物对6种染料都有明显的脱色效果，甲基橙、橙I、次甲基蓝脱色率在90%左右，刚果红、直接湖蓝脱色率在80%左右，结晶紫脱色率在60%左右. 无酶情况下染料的脱色主要是菌球的吸附，有酶情况下染料的脱色主要是酶的降解. 菌球在脱色过程中除了吸附染料外，还起到提供H2O2和藜芦醇的作用，促进了染料的降解.