产甘油假丝酵母两种转化方法的比较

为了研究产甘油假丝酵母高产甘油和耐高渗的机制,以Zeocin作为选择标记,考察和比较了两种转化方法,即醋酸锂法和电转化法的转化效果,以建立简单有效的产甘油假丝酵母转化体系。结果表明,细胞生长时期是影响转化率的关键因素。在OD600约为1.3时制备感受态细胞,在电压为1.5 kV时进行电击,可获得较高转化率,为每微克DNA 139个转化子。在OD600约为1.0时制备感受态细胞,醋酸锂预处理细胞1 h,获得的转化率为每微克DNA 154个转化子。综合考虑,醋酸锂法更适合于产甘油假丝酵母的转化。     

双酶法芭蕉芋糖化工艺研究

为获得优质发酵甘油原料葡萄糖浆 ,对去皮芭蕉芋粉糖化工艺进行了研究 ,确定了去皮芭蕉芋粉双酶法糖化工艺流程 ,以及液化和糖化的最佳工艺条件 :粉乳质量分数 2 5 % ,液化酶添加量 18u/ g ,液化 pH 6 0～ 6 5 ,糖化酶添加量 15 0u/g和糖化 pH 4.0～ 4.5时 ,糖化效果最好 ,糖化DE值可达 97%以上     

溶氧对Candida glycerinogenes产甘油发酵代谢流分布的影响

分析了耐高渗高产甘油工业菌株产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)的摇瓶发酵过程,发现溶氧水平是影响C.glycerinogenes 生长、代谢产物生成的重要因素。在此基础上,以5 L发酵罐研究了不同恒溶氧水平甘油的合成过程,通过代谢流分析表明,低溶氧环境下乙醇碳流量增加,导致糖耗快而甘油合成相对较少;碳流分布表明HMP途径在甘油过量合成中起着重要的作用。分析C.glycerinogenes发酵过程中能量代谢和物质代谢（氧化磷酸化和底物水平磷酸化）的变化发现高溶氧环境下ATP合成水平高,一定程度抑制底物水平磷酸化从而使碳流更多地流向了甘油合成;C.glycerinogenes胞内氧化还原平衡(NADH/NAD+比率)的研究进一步解释了产甘油假丝酵母中甘油合成和乙醇生成的竞争关系。     

产1,3-丙二醇新型重组大肠杆菌JM109（pHsh-dhaB-yqhD）的构建及其转化甘油

利用温控载体pHsh将编码甘油脱水酶的基因dhaB和编码1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶的基因yqhD串联构建重组质粒pHsh-dhaB-yqhD, 将其转化大肠杆菌得到新型产1,3-丙二醇重组大肠杆菌JM109(pHsh-dhaB-yqhD), 并对影响该重组菌发酵的营养因子进行研究.实验结果表明：该重组菌转化甘油合成1,3-丙二醇的适宜培养基组成为甘油60 g·L^-1、酵母膏5.0 g·L^-1、维生素B₁₂ 0.05 g·L^-1以及KH₂PO₄ 7.5 g·L^-1; 以此培养基在5 L发酵罐上进行放大, 1,3-丙二醇产量、转化率和生产能力分别达到43.26 g·L^-1、72.2 %和1.55 g·L^-1·h^-1.     

水工建筑物控制爆破中的拆除爆破问题探讨

本文通过桦甸市关门砬子水库除险加固及扩建工程对原溢流坝段的启闭排架及浆砌石闸墩汛前实施拆除爆破,从爆破设计,连体建筑物安全,药量计算,爆破效果及保护层处理等方面进行了全面地探讨。     

絮凝酿酒酵母的构建及其发酵特性

把S.cerevisiae W303-1A的絮凝基因FLO[STBX]1[ST]〖HT5”〗和G418抗性基因kanMX接入质粒pYX[STBX]212[ST]〖HT5”〗,构建重组质粒pYX-FLO-kan并转化S.cerevisiae ZWA46,得到了较强絮凝能力且传代稳定的重组菌ZWA46-F2。考察其絮凝能力及发酵特性,实验结果表明：该重组菌在生长稳定期前期启动絮凝,与葡萄糖的耗竭非耦联;在初始pH 2.5～6.0范围内絮凝值无明显改变;乙醇产量最高达到8.6% (体积),乙醇对葡萄糖的转化率达到其理论转化率的89.8%。重组菌ZWA46-F2良好的絮凝性能有利于从发酵液中分离细胞和细胞回用,在燃料乙醇工业生产中有一定的应用价值。     

利用PCR-DGGE技术筛选分离海南黄帝椒产品微生物

黄帝椒是海南特产高辣度辣椒。该研究以黄帝椒产品为原料,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术分析了其微生物种群关系,并结合传统平板筛选法进行菌种分离及鉴定,获得了海南特辣黄帝椒产品优势微生物。研究结果显示,海南黄帝椒产品平板筛选分离到了Pseudomonas stutzeri,Lactobacillus plantarum,Lactobacillus brevis等可培养的菌株;DGGE图谱中检测到了6个条带,其中,乳酸菌占总菌数的65%,处于最优势地位,假单胞菌占总菌数的16%,处于次要地位。该研究也首次提及了不同的微生物对黄帝椒产品的颜色、脆性的影响。     

转基因食品的快速PCR鉴定

用十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵(CTAB)法快速高效地从样品中提取了可供分析的基因组DNA，经PCR扩增，鉴定了含有35S启动子和NOS终止子的转基因样品，该方法的灵敏度可达0．1％，并且具有很好的稳定性。     

荧光素酶编码基因luc在大肠杆菌中的克隆、表达及纯化

以荧光虫荧光素酶报告载体pXP2 DNA为模板,扩增得到编码萤火虫荧光素酶(LUC)的基因(luc),构建了诱导型表达载体pQE30-luc.将载体导入 E.coli M15获得高效诱导表达萤火虫荧光素酶基因的重组菌M15/pQE30-luc.SDS-PAGE电泳分析显示:重组蛋白的相对分子质量为 60 000 ,表达量占全菌胞内可溶性蛋白质的50.9 %. 利用表达载体pQE30上的His*Tag标记选用Ni柱纯化表达具有活性的萤火虫荧光素酶(LUC),纯化后比酶活达到1.43×10 9 RFU/ mg,纯化倍数达10.6倍,回收率为25.3%.     

磷源对产甘油假丝酵母发酵生产甘油的影响及动力学分析

甘油是一种重要的轻化工原料,广泛应用于化妆品、牙膏、烟草、香精、水性油墨、印染纺织、涂料、合成树脂、皮革、造纸、制药、食品和国防等各个领域的1700多种产品．在我国,由于受合成洗涤剂的冲击,肥皂行业日渐萎缩,甘油产量大幅下降．因此,利用耐高渗酵母发酵生产甘油的产业化前景看好．