酶法催化柚皮苷制备根皮素及其抗氧化活性分析

本文阐述一种高效，环保制备高价值天然抗氧化剂根皮素的方法。以天然的柑橘提取物柚皮苷为原料，经一锅法加氢反应制得柚苷二氢查尔酮，再以α-鼠李糖苷酶（α-rhamnosidase）和纤维素酶（cellulase）高效催化水解而制得根皮素。采用单因素和正交实验对α-鼠李糖苷酶和纤维素酶酶解反应的pH、温度、酶与底物比进行优化，同时对根皮素、三叶苷、柚苷二氢查尔酮、柚苷的抗氧化性进行了研究，结果表明：α-鼠李糖苷酶（α-rhamnosidase）酶解最佳工艺为温度60 ℃、pH 4、酶与底物比为0.6:1；纤维素酶（cellulase）最佳工艺为温度45 ℃、pH 5.5、酶与底物比为0.3:1。在此工艺下根皮素的转化率为96.10%，比原工艺提高了10.53%。抗氧化性研究结果为：清除DPPH自由基能力根皮素（0.18±1.45）>三叶苷（0.3±1.63）>柚苷二氢查尔酮（0.95±1.24）>柚苷（8±1.97）,还原铁离子能力为根皮素（7.1±0.68）>三叶苷（2.51±0.75）>柚苷二氢查尔酮（2.05±0.58）>柚苷（0.11±0.92）。本方法条件温和，周期短且转化率高，易于放大生产。抗氧化性结果表明根皮素具有较高的抗氧化性。这对根皮素的放大生产及应用具有重大意义。     

天然植物紫外线防护效果研究

为探索天然植物在防晒化妆品中的应用,选择天然植物提取物根皮素、白藜芦醇和熊果苷,研究其安全性及紫外线防护效果。采用紫外分光光度法测定天然植物提取物的紫外吸收特征,同时将其复配成防晒产品。在采用封闭式斑贴试验评价防晒产品安全性的基础上,应用人体试验测定产品防晒指数(SPF值)和长波紫外线防护指数(PFA值)。结果发现,3种植物提取物表现出不同的紫外吸收能力,中波紫外线(UVB)波段吸收效果优于长波紫外线(UVA)波段,且白藜芦醇的紫外吸收效果相对最好;人体斑贴试验证明3种天然植物提取物均具有良好的皮肤适应性;防晒效果人体试验显示白藜芦醇和根皮素令SPF值有较为明显的提高。研究表明,部分天然植物提取物表现出良好的紫外线防护效果,且与传统的化学和物理防晒剂相比,具有皮肤刺激性小、光化学稳定、安全可靠等优点,具有广阔的市场前景。     

正交试验法优选苹果树皮中根皮素的提取研究

分别采用浸提法、微波法、超声波法和回流法提取苹果树皮中根皮素,利用高效液相色谱测定含量,确定最适提取方法,并考察了盐酸水解对提取效果的影响。通过单因素实验和正交试验L1(645)确定最优提取工艺。结果表明:最佳提取方法为加热回流法,最佳提取工艺为:以体积分数90%乙醇和1.08%的盐酸混合溶液为提取溶剂,在料液比1∶15(g∶mL)的条件下,回流提取3次,每次2h,根皮素的得率为11.8mg/g。     

根皮素对硫代乙酰胺诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

本实验旨在研究根皮素对硫代乙酰胺诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。采用硫代乙酰胺造模,诱导小鼠急性肝损伤,以槲皮素作为阳性对照药物,通过检测血清学指标（丙氨酸氨基转移酶ALT、天冬氨酸氨基转移酶AST、γ-谷氨酰转肽酶γ-GT、 碱性磷酸酶ALP和血清总胆红素TB）和组织病理切片方法,研究根皮素对小鼠急性肝损伤的保护作用。实验结果显示,在预先灌胃高、低剂量根皮素组别中,小鼠血清ALT 活性分别为（149.14±21.55） U/L和（189.43±16.64） U/L,AST 活性分别为（123.58±35.90） U/L和（168.64±33.32） U/L。-γ--GT 活性分别为（103.19±20.93） U/L和（129.30±27.91） U/L,ALP 活性分别为（19.67±3.32） King U/dL和（24.17±3.58） King U/dL,血清TB浓度分别为（198.14±29.64） -μ-mol/L 和（227.04±34.20） -μ-mol/L。相比于造模组,根皮素组ALT、AST、-γ--GT、ALP和TB明显降低（-n-=8,-p-<0.05）,而且降低幅度呈现剂量依赖性,根皮素处理组的小鼠肝组织病理学病变得到了显著改善。研究表明,根皮素对硫代乙酰胺诱导的小鼠急性肝损伤有显著的保护作用,是值得进一步研究的急性肝损伤保护的候选药物和食品添加剂。     

Swelling-activated anion channels are essential for volume regulation of mouse thymocytes

Channel-mediated trans-membrane chloride movement is a key process in the active cell volume regulation under osmotic stress in most cells. However, thymocytes were hypothesized to regulate their volume by activating a coupled K-Cl cotransport mechanism. Under the patch-clamp, we found that osmotic swelling activates two types of macroscopic anion conductance with different voltage-dependence and pharmacology. At the single-channel level, we identified two types of events: one corresponded to the maxi-anion channel, and the other one had characteristics of the volume-sensitive outwardly rectifying (VSOR) chloride channel of intermediate conductance. A VSOR inhibitor, phloretin, significantly suppressed both macroscopic VSOR-type conductance and single-channel activity of intermediate amplitude. The maxi-anion channel activity was largely suppressed by Gd(3+) ions but not by phloretin. Surprisingly, [(dihydroindenyl)oxy] alkanoic acid (DIOA), a known antagonist of K-Cl cotransporter, was found to significantly suppress the activity of the VSOR-type single-channel events with no effect on the maxi-anion channels at 10 μM. The regulatory volume decrease (RVD) phase of cellular response to hypotonicity was mildly suppressed by Gd(3+) ions and was completely abolished by phloretin suggesting a major impact of the VSOR chloride channel and modulatory role of the maxi-anion channel. The inhibitory effect of DIOA was also strong, and, most likely, it occurred via blocking the VSOR Cl(-) channels.     

根皮素对秀丽隐杆线虫寿命的影响

目的：研究根皮素对秀丽隐杆线虫延长寿命作用及其作用机制。方法：给予秀丽隐杆线虫一定质量浓度的根皮素（25、50、75 μg/mL）,分析根皮素对线虫寿命、运动能力、吞咽能力、抵抗应激能力、活性氧和脂褐素水平的调控作用,通过测定正常及突变体线虫的抗氧化酶活力、相关基因表达水平,对根皮素延长寿命的潜在机理进行了初步探讨。结果：根皮素能够显著延长线虫的寿命并抑制衰老相关的运动能力下降,增强抵抗应激能力（双氧水、紫外和高温）,提高抗氧化酶活力（超氧化物歧化酶和过氧化氢酶）和自由基清除能力,减少脂褐素堆积和丙二醛的生成。采用根皮素喂养线虫后,daf-2和age-1 mRNA表达水平显著下降（P＜0.05,P＜0.01）,daf-16和sir-2.1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）。突变体线虫经根皮素处理后,daf-2（e1370）、daf-16（mu86）和sir-2.1（ok434）突变体线虫寿命无显著延长;eat-2（ad1116）突变体线虫寿命显著延长（P＜0.05）;且促进了DAF-16的核定位,并激活了其下游靶基因sod-3、ctl-1和hsp-16.2 mRNA的表达。结论：根皮素可以通过胰岛素信号通路和SIR-2.1信号通路,促进DAF-16的核定位,提高机体应激抵抗能力和抗氧化能力,延长线虫寿命。     

Protective Effects of a New Phloretin Derivative against UVB-Induced Damage in Skin Cell Model and Human Volunteers

The phenolic compound phloretin is a prominent member of the chemical class of dihydrochalcones. Phloretin is specifically found in apple and apple juice and known for its biological properties. We were particularly interested in its potential dermo-cosmetic applications. However, practical limitations of phloretin do exist due to its poor water-solubility. Phloretin was sulfonated with sulfuric acid (98%, wt) and mixed with saturated salt water to produce phloretin 3'',3-disulfonate in order to increase its water-solubility. Here we reported the photoprotective effect of phloretin 3'',3-disulfonate (PS), a new semi-synthetic derivative of phloretin. Results showed that PS attenuated cyclobutane pyrimidine dimer (CPDs) formation, glutathione (GSH) depletion and apoptosis induced by ultraviolet B (UVB). The photoprotective effect of PS is tightly correlated to the enhancement of nucleotide excision repair (NER) gene expression. Furthemore, PS had inhibitory effects on UVB-induced release of the inflammatory mediators, such as IL-6 and prostaglandin-E₂. We also confirmed the safety and clinical efficacy of PS on human skin. Overall, the results demonstrated significant benefits of PS on the protection of keratinocytes against UVB-induced injuries and suggested its potential use in skin photoprotection.     

2,4,6,4＇-四羟基脱氧安息香的合成及其抑制酪氨酸酶活性的研究

合成2,4,6,4'-四羟基脱氧安息香(THDB),对其抑制酪氨酸酶活性进行评价。在无水氯化锌和氯化氢存在下,以间苯三酚和对羟基苯乙腈为原料,进行THDB的合成,并对所得化合物在0.05%、0.10%、0.20%、0.25%、0.30%、0.35%、0.40%七个浓度下与根皮素、熊果苷和曲酸进行抑制酪氨酸酶对比实验。收率由原来报导的46.5%提高到60.0%,在0.4%浓度时THDB对酪氨酸酶的抑制率达98.2%。本工艺是合成THDB的较佳工艺,THDB对酪氨酸酶的抑制作用比熊果苷和曲酸好,与根皮素相当。     

根皮苷生物转化制备根皮素工艺优化研究

研究酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）生物转化根皮苷制备根皮素的工艺条件。以根皮素产率为考察指标,采用单因素试验考察转化时间、转化温度、底物质量浓度和液料比,然后采用响应面分析法对根皮素制备工艺条件进行优化。结果表明,根皮苷生物转化最佳工艺条件确定为：转化时间18 h、转化温度41 ℃、液料比12∶1（V/V）,底物质量浓度8 g/L。在此条件下,根皮素产率可达70.12%,与模型理论值（70.97%）基本相符。利用本方法制备根皮素,成本低、转化率高,为工业化的生产提供理论依据。     

提升苹果二氢查尔酮对结肠癌细胞抑制功效的研究

本文采用结肠癌细胞模型,探究了增强苹果来源二氢查尔酮对结肠肿瘤抑制功效的方法。一方面,采用MTT法考察了根皮素及其类似物对结肠癌细胞增殖的抑制作用,发现200μmol/L根皮素对HT29、SW620与HCT116三种结肠癌细胞作用72 h的抑制率分别为74.18%、52.91%与72.78%,抑制活性与普遍性强于多种二氢查尔酮类似物,并呈现剂量与时间效应。另一方面,通过根皮素与多种果蔬功效成分的联合作用,发现在SW620与HCT116细胞中,根皮素与白藜芦醇及姜黄素之间存在相互作用。尤其对HCT116细胞,根皮素与姜黄素联合使用时的IC50值分别为69.78μmol/L与4.27μmol/L,显著低于单独使用时的153.88μmol/L与8.80μmol/L,两者以20:1的剂量比使用时,其联合指数均小于1,表现为协同效应,且在低浓度时更为显著。本研究为深入研究苹果二氢查尔酮的结肠癌抑制功效奠定了理论基础,并为指导消费者合理搭配膳食提供了科学依据。