苯酚提取-超高效液相色谱法测定烟草中的磷酸腺苷

摘 要: 建立了苯酚提取超高效液相色谱法（UPLC）同时测定新鲜烟叶中三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）和单磷酸腺苷（AMP）3种磷酸腺苷的分析方法。苯酚提取样品溶液中的ATP、ADP和AMP较稳定,不易水解,样品在2 h以内各磷酸腺苷变化率小于10 %。采用6 ‰三乙胺（pH=6.6）和甲醇作为流动相梯度洗脱,3种磷酸腺苷在10分钟内实现了较好的分离,线性范围（5～200）μg/mL内,磷酸腺苷浓度与峰面积具有很好的相关系数（r>0.9999）,3种磷酸腺苷检测限分别为0.5 μg/mL、0.4 μg/mL、0.3 μg/mL,回收率在91.68 %～110.79 %之间,相对标准偏差RSD在1.53 %～3.67 %之间。该方法可快速、准确检测烟草样品中ATP含量,进而为研究烟草能量代谢尤其不育系的产生机理,提供重要的检测指标。      

拮抗菌AM6代谢产物防治烟草赤星病试验

为开发更多的生物农药,进行了球孢链霉菌AM6代谢拮抗物质防治烟草赤星病试验。采用不同的施用浓度、不同的施用次数在自然发病条件下进行田间小区防效试验。结果表明,含有AM6拮抗物质的制剂喷雾烟草叶片对烟草赤星病有较好防治效果。其防效随制剂中拮抗物质含量的增加而提高,以100倍液施用2次防效较好,田间防效为80.3%;400倍液施用1次、2次和3次的防效分别为46.9%、64 9%和69.3%。含有AM6拮抗物质的制剂对烟草无明显药害。     

不同肥料对红花大金元中部叶片腺毛及分泌物积累的影响

采用大田试验,结合GC/MS定量分析研究了有机肥对烤烟"红花大金元"中部未熟期和成熟期叶片腺毛密度、腺毛类型及腺毛分泌物主要成分累积的影响。结果表明:有机肥与无机肥条件下,腺毛均有4种类型,包括长柄腺毛、短柄腺毛、分杈腺毛和无头腺毛,其中长柄腺毛是主要类型,大约占总腺毛数的61.27%~76.73%;与未熟期相比,成熟期施有机肥的烟叶长柄腺毛比例减小,短柄腺毛比例增加,施无机肥的情况相反;施有机肥的中部未成熟烟叶腺毛密度与施无机肥的差异不明显,但施有机肥的中部成熟烟叶的腺毛密度比施无机肥的高22.10%,其中短柄腺毛密度明显增加;成熟期施有机肥的腺毛密度比未成熟期的降低了2.04%,而施无机肥的降低了21.14%;施有机肥的烟叶腺毛分泌物中,α、β-西柏三烯-4-醇和α、β-西柏三烯-4,6-二醇的含量比施无机肥的高。     

三唑酮分子印迹纳米球的制备及应用

建立了烟叶中8种三唑类杀菌剂残留的分子印迹固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱（MISPE-UPLC-MS/MS）检测方法。实验中，运用计算机模拟技术筛选最佳功能单体及溶剂，并确定最优聚合反应配比，估算了TDF-MAA的自组装过程与红外光谱图，热力学分析表明TDF-MAA自组装为吸热非自发过程，预聚合反应温度拟定为30℃；采用沉淀聚合法制备了三唑酮分子印迹聚合物纳米颗粒，颗粒粒径分布均匀，平均粒径为200nm；该纳米颗粒对模板分子及其结构类似物具有良好的特异性吸附能力，针对模板分子的分离印迹因子达到2.42；将加标烟叶样品经该纳米颗粒组装的固相萃取柱进行前处理，用UPLC-MS/MS分析前处理液，烟叶中8种三唑类杀菌剂的固相萃取回收率为70.14%～105.43%，检出限为4.82～11.97ng/mL，相对标准偏差（RSD）为0.26%～2.27% （n=6），实现了复杂基质烟叶中多种三唑类杀菌剂的同时检测。     

云南省烟草赤星病菌致病力分化及生物防治研究

从省内烟草种植区分离到烟草赤星病菌39株,利用离体叶片悬滴法,在感病品种RG17上进行致病力分化测定。结果表明,上述病菌的致病力按照病情指数可分为4种类型：即强、中、弱、不致病。从上述代表不同致病力的菌株中选取7株菌,采用对峙法与18株木霉菌对峙培养,从中筛选出一株对赤星病菌具极强拮抗作用的菌株TV-1。TV-1与赤星病菌的孢子混和液在PDA平板上的孢子萌发试验表明,TV-1不能抑制病菌孢子的萌发但能抑制其芽管的伸长。用TV-1制成的菌剂进行离体叶片、烟草苗期、大田期防效测定。结果表明：该菌剂为10^5个／mL时,具有抑制离体叶片病斑扩展的作用;浓度达10^7个／mL时,可明显防止病斑出现;同时它还能促进烟苗生长,其中苗期施用量,TV-1菌剂：营养土=1：15,促生效果显;苗期防猝倒病与对照相比防效达86．5％;大田营养袋亩施颗粒剂31kg、62kg,叶面喷施孢子液剂10^4个／mL4次,与对照相比对赤星病的防效分别高达60．57％、70．53％。     

连续流动分析法测定烟用有机肥中的氯离子含量

为了快速检测烟用有机肥中的氯含量,研究了烟用有机肥样品的前处理条件和连续流动法测定烟用有机肥中氯含量的回收率、精确度,并与硝酸银滴定法的测定结果进行了比较.结果表明:①适宜的前处理条件为称样量0.3g,提取溶剂50 mL去离子水,振荡萃取时间60 min;②方法的平均回收率为100.7％～103.0％,相对标准偏差0.31％～5.40％;③该方法的测定结果与硝酸银滴定法无显著性差异.     

UPLC-MS-MS快速测定烟草中131种农药残留量

采用QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法建立了烟草中131种农药残留的同时测定方法，样品用1%乙酸-乙腈萃取，氯化钠和无水硫酸镁盐析，经PSA固相分散吸附剂净化，采用正负离子多反应监测（MRM）模式检测，外标法定量。结果表明，131种农药在1~200 μg/L范围内线性关系良好，决定系数（r²）均大于0.99，方法的检出限为0.05~24.50 μg/kg，131种目标物的平均回收率为65.3%~112.4%，RSD为3.2%~7.3%。该方法简便、快速、灵敏、可靠，适用于烟草中131种农药残留的快速测定。     

固相萃取气相色谱法检测烟叶中拟除虫菊酯类杀虫剂残留

[目的]建立烟叶中拟除虫菊酯类杀虫剂多残留的固相萃取-气相色谱检测方法.[方法]烟叶样品经正己烷-乙酸乙酯超声提取、Florisil固相萃取柱净化后,用气相色谱电子捕获检测器检测.[结果]7种拟除虫菊酯类杀虫剂在0.1、0.5、1.0 mg/kg三个加标水平上的回收率为85.32％～101.21％,相对标准偏差为2.97％～4.88％,检出限为0.003～0.005 mg/kg.[结论]该方法灵敏准确,适用于烟叶中拟除虫菊酯类杀虫剂多残留分析.     

氮素营养对烤烟叶片淀粉积累及SPS、淀粉酶活性的影响

在大田条件下研究了烤烟红花大金元(HD)和K 326叶片淀粉积累动态,分析比较了不同施氮量和氮素形态对叶片淀粉含量和蔗糖磷酸酯合成酶(SPS)、淀粉酶活性的影响.烟株生长进入成熟期后,叶片开始快速积累淀粉,接近成熟时达到最高;中部叶片淀粉含量HD为40%左右、K 326为25%左右.成熟期叶片淀粉含量、SPS活性与施氮量呈负相关,HD淀粉酶活性随施氮量增加呈下降趋势,K326淀粉酶活性与施氮量的关系在刚封项后为负相关,叶片接近成熟时为正相关.施氮不足或过量会增加原烟淀粉含量.氮素形态对HD淀粉代谢的影响不如K 326明显;在N-NH4+N-NO3-为11时,K 326淀粉含量、SPS和淀粉酶活性较低.     

国内外主产烟区烤烟化学成分分析

为了鉴别国内外不同产地烤烟化学成分的差异,采用烟草行业标准方法对国内外主要烤烟产区294个烤烟样品的72个常规和香气化学指标进行了全面数据采集和统计分析。在国内主要烤烟产区之间,筛选出湖南、贵州、云南等主产区的差异性化学组分。在国外主要烤烟产区之间,筛选出巴西、津巴布韦、美国等产地烤烟的差异性化学指标。对国内外主要产区烤烟化学成分进行比较,发现国内烤烟的总氮、多酚、氯、钾、挥发酸、挥发碱、总植物碱、石油醚提取物等指标显著低于国外烤烟,而蛋白质、总糖、还原糖、糖碱比、氮碱比则显著高于国外烤烟。