MAPK信号通路调节卷烟烟气诱导的炎症因子的释放

为评估卷烟烟气对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性效应,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)对BEAS-2B细胞进行检测,使用光学显微镜对细胞形态进行观察,采用Western Blot实验检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)和p38的磷酸化水平的变化,采用酶联免疫吸附实验检测炎症因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的释放水平。结果表明:①卷烟烟气染毒会显著降低BEAS-2B细胞的存活率。②卷烟烟气染毒会激活磷酸化的ERK1/2、JNK1/2和p38信号通路,并且会诱导炎症因子IL-1β、IL-6和IL-8释放水平升高。③特异性抑制剂分别抑制ERK1/2、JNK1/2和p38信号通路后,炎症因子释放水平显著下降。卷烟烟气诱导的炎症受MAPK信号通路的调节,该结果可为卷烟烟气诱导的肺部炎症相关疾病的机制研究提供参考。     

电子烟消费者抽吸容量测试方法

为建立电子烟消费者抽吸容量的测试方法,研制了适用于不同口径电子烟的CReSS Pocket吸烟行为记录仪接口,采用外标曲线校准法解决了记录仪在大抽吸容量下测试不准确的问题,并通过改变记录仪的测试方向,消除了电子烟气溶胶沉积对测试结果的影响。结果表明:(1)该方法适用于不同类型、不同口径电子烟产品消费者的抽吸容量测试;(2)在20~250 m L的抽吸容量范围内,该测试方法具有良好的准确度和精密度。应用所建方法测试了20名电子烟消费者的抽吸容量,证实了该方法具有较好的适用性。     

不同种属来源活化体系中CYP2A6酶活及其对烟碱代谢的动力学

为探讨10种不同种属来源活化体系中CYP2A6蛋白的表达水平与酶活性之间的关系,包括来自人体的细胞(BEAS-2B、HepG2和巨噬细胞)及肝微粒体(25供体混合性别人肝微粒体及男性人肝微粒体)、实验室常用不同动物肝微粒体或S9(雄性SD大鼠肝微粒体、雄性恒河猴肝微粒体、雄性比格犬肝微粒体及雄性大鼠诱导肝S9)和同源重组酶,通过免疫印迹法测定其CYP2A6蛋白表达水平,并以烟碱的代谢活化为基础,通过HPLC-MS/MS法测定其酶代谢动力学参数。结果表明:①10种活化体系中CYP2A6酶活具有明显差异,烟碱分别与25供体混合性别人肝微粒体、同源重组CYP2A6酶及雄性恒河猴肝微粒体共孵育时其浓度明显降低,另外7种活化体系中无酶活或活性较低;②CYP2A6蛋白表达水平与CYP2A6酶活具有一定的相关性。研究结果可为卷烟烟气体外毒理学评价中代谢活化体系的选择提供参考,也可为进一步了解CYP2A6基因多态性对烟碱代谢的影响提供体外实验数据。     

普通烟草WOX转录因子家族的全基因组鉴定及分析

  背景  WOX（WUSCHEL-related homeobox）转录因子家族是植物特有的一类转录因子家族,被报道参与生长发育、细胞间通讯、干细胞分裂分化稳态调控和器官发育等过程。  方法  利用比较基因组学和生物信息学的方法,在烟草基因组中对WOX转录因子成员进行鉴定,并进行进化分析、共线性分析、保守基序分析以及表达模式等分析。  结果  （1）从烟草基因组中鉴定出23个WOX转录因子家族成员编码基因,其中15个NtWOX基因定位到染色体上;（2）系统发育分析表明,普通烟草和拟南芥的WOX转录因子被分成了3个亚支和9个亚家族;（3）共线性分析发现若干普通烟草NtWOX基因存在于普通烟草与拟南芥基因组的共线性区段中;（4）复制事件分析表明串联重复或者全基因组重复事件在普通烟草WOX家族扩张中起重要作用;（5）保守基序分析表明同一亚家族内NtWOX成员的保守基序的组织形式高度相似;（6）表达分析表明普通烟草NtWOX基因表达具有组织特异性;（7）GO注释分析发现普通烟草NtWOX转录因子参与组织器官发育、细胞间通讯过程和胁迫响应等生物学过程。  结论  本研究在普通烟草中鉴定并系统分析了WOX转录因子家族成员,为其功能研究奠定基础。