对虾肠道中产毒镰孢菌抑制菌的筛选与鉴定

为了获得对产毒镰孢菌具有抑制效应的海洋细菌,从对虾肠道中分离细菌,并将分离得到的优势细菌与产T-2毒素的禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)(FG1207)进行固体对峙培养,具有抑菌圈的细菌菌落即为产毒镰孢菌的抑制菌。然后选取对FG1207具有抑制作用的细菌与FG1207进行液体共同培养,用LC-MS/MS技术检测菌悬液中T-2毒素含量,最后对具有抑制FG1207的生长和降解T-2毒素效果的细菌进行16s r RNA序列鉴定和VITEK2细菌生化鉴定。实验结果分离得到8株优势细菌,其中一株对FG1207的生长具有明显的抑制作用;LC-MS/MS检测发现该细菌与FG1207共同培养菌悬液中未检测到T-2毒素,说明该细菌不仅能够抑制产毒镰孢菌的生长,还能降解T-2毒素。经16s r RNA鉴定该细菌为海洋尼泊尔葡萄球菌(Nepal Staphylococcus Aureus),相似度为99.93%,VITEK2细菌生化鉴定的相似度为96.86%。     

基于灰度直方图对白芨多糖胶复合乳化剂配方筛选和稳定性评价

以白芨多糖胶为乳化稳定剂,Tween60（T）、Span20（S）、单甘酯（D）为乳化剂,研究白芨胶在O/W型花椒精油乳化体系中的配伍性能。实验采用乳液相差显微数字化图片进行灰度分析,通过直方图的标准偏差,对乳液粒子分散特性进行评价。在此基础上,结合稳定性实验,提出直方图的标准偏差SD可以作为判非依据,可提高配方筛选效率。     

白芨多糖胶对花椒精油乳液稳定性研究

以花椒精油为乳化对象,采用Tween60（T）、Span20（S）、单甘酯（D）和白芨多糖胶（B）为乳化剂或乳化助剂,对单组份及双组份配比的乳化效果进行评价,结合乳液微滴的相差显微观测,初步确定了花椒精油的乳化剂配方。由Span60和白芨多糖胶合理配伍,可获得具有良好稳定性的O／W型乳化体系。白芨多糖胶是天然亲水性高分子,能有效增强司盘、吐温对花椒精油的乳化效果,并赋予产品较好的表观稠度和厚重感。     

南美白对虾肝胰腺蛋白提取方法优化及无水保活环境胁迫对细胞凋亡蛋白的影响

为提高Western Blotting结果的可靠性，以蛋白溶出率和凝胶电泳蛋白条带完整性为指标，比较提取液种类、研磨方式、酶抑制剂种类及其体积分数和提取时间对南美白对虾肝胰腺蛋白提取效果的影响。采用优化后的提取方法获得高质量蛋白样品，并采用Western Blotting法分析无水环境胁迫后南美白对虾肝胰腺组织中细胞凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。结果表明：RIPA裂解液作为提取溶剂所得的蛋白溶出率高于水提和磷酸盐缓冲液，电动匀浆和液氮研磨所得蛋白条带更完整，4%蛋白酶磷酸酶混合抑制剂能有效抑制肝胰腺内源酶引起的蛋白降解；采用Western Blotting法分析无水保活期间南美白对虾肝胰腺蛋白，发现低温诱导休眠的同时会引起细胞轻微凋亡，且凋亡水平呈应激时间依赖性增加，环境胁迫解除后有所回调。     

冷藏凡纳滨对虾色差值与若干典型质量性状的灰色关联分析

探索凡纳滨对虾在冷藏过程色差值ΔE*与一些典型质量性状的相关程度。将对虾置于4℃冷藏,每隔1d取出对虾,检测典型质量性状:细菌总数(CFU)、挥发盐基氮(TVB-N)含量、多酚氧化酶(PPO)活性、蒸煮损失率、肌肉pH值及对虾的色差值△E*,并将所得数据用灰色关联分析法分析。试验结果显示:△E*与CFU、TVBN含量、PPO活性以及pH值的关联度都大于0.6,而与蒸煮损失率的关联度小于0.6,△E*与这些质量性状的关联度由大到小排序为:PPO活性细菌总数TVB-N含量肌肉pH值蒸煮损失率。试验结果表明:凡纳滨对虾冷藏过程中,PPO活性、细菌总数、TVB-N含量和肌肉pH值都与△E*具有显著的相关关系,其中PPO活性与△E*的相关程度最高,而蒸煮损失率与ΔE*的相关关系不明显。     

典型冷链温度下南美白对虾品质劣变规律及 相关性分析

目的探究典型冷链贮藏温度下南美白对虾品质劣变规律及相关性。方法采用感官评价、仪器分析和理化分析的方法对南美白对虾在-23、0、5℃贮藏温度下的感官、色差、挥发性盐基总氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)含量进行分析与检测,并采用Pearson线性回归分析三者之间的相关性。结果 3种典型冷链贮藏温度下南美白对虾的感官品质变化差异显著,-23℃条件下感官评分一直处于8.0左右;0℃下感官评分在前3 d基本维持在7.0以上,之后快速下降,至第5 d时下降至4.0以下,失去商品价值;5℃条件仅在第1 d维持在7.0以上,第2 d时开始迅速下降。亮度值自贮藏第2 d起不同冷链温度下都有显著性差异(P0.05)。TVB-N值在-23℃条件下第9 d仍在20 mg/100 g以下,而0℃第3 d即发生显著升高(P0.05)。Pearson相关系数表明,TVB-N值与感官评分及亮度变化存在显著相关性。结论与理化检验法相比,感官评价结合色差测定的方法可准确、快速反映对虾鲜度,预测产品货架期。     

高效液相色谱-串联质谱法检测副溶血弧菌生物被膜形成过程中的N-酰基高丝氨酸内酯信号分子

N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)是副溶血弧菌的群体感应系统的信号分子,参与微生物的毒力调控,目前缺乏准确检测生物被膜中的信号分子的方法。在现有信号分子HPLC-MS/MS检测条件基础上,针对副溶血弧菌生物被膜生成过程中信号分子定性定量检测方法进行优化。结果显示:无水甲醇:0.1%乙酸铵水为流动相分离效果较优;当选择碰撞能量为10~15 eV时,各信号分子均可形成较高比例的特征碎片离子(m/z)102.1和74.1,并在0~20 μg/L范围内均有良好的线性关系(R2>0.995),采用该法能够检测副溶血性弧菌生物被膜形成过程中产生的C₄-HSL、3-oxo-C₆-HSL和3-oxo-C₁₄-HSL三种信号分子,其中C₄-HSL的量占绝对优势(>91.67%)。在生物被膜形成的前期(0.5~3 d),信号分子的浓度缓慢增长,与生物被膜的生成量成正相关;当被膜进入消散期时(4~5 d),信号分子的浓度快速增长,与被膜生成量呈显著负相关。高效液相色谱-串联质谱法的优化有助于更加有效地检出生物被膜中的信号分子,为更好地认识生物被膜与群体感应信号分子间的调控关系提供支撑。     

一株拮抗海鱼干优势耐盐真菌芽孢杆菌HY-5筛选及其抗菌成分鉴定

目的:开发新的海鱼干耐高盐优势真菌抑制剂。方法:取用湛江市特呈岛红树林海域的海水、海泥以及红树林的根、茎和叶的样本,利用琼脂扩散法和平板点种法筛选出一株强抗菌活性菌株HY-5,通过传统细胞形态观察并结合生理生化实验及16S rDNA序列进行分析鉴定;利用杯碟法测定上清液对17株霉变海鱼干优势真菌抗菌谱,发酵液酸沉后经LC-MS检测其抗菌成分。结果:HY-5被鉴定为解淀粉芽孢杆菌,其上清液对17株霉变海鱼干优势真菌均有明显抗菌作用;LC-MS检测到HY-5发酵液中含2组抗菌脂肽surfactin(994.6、1008.6、1022.5和1036.6)和iturin(1016.5、1030.5、1044.4和1058.3)组分。结论:海洋源解淀粉芽孢杆菌HY-5的粗提液中含有抗菌脂肽,其对霉变海鱼干优势真菌有较强的拮抗作用。     

纳豆芽孢杆菌NT-6固态发酵罗非鱼下脚料条件优化及产脂肽组分分析

利用纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto）NT-6,以罗非鱼下脚料为主要基质,进行固态发酵生产抗菌营养复合型活性肽,以提高抗菌脂肽产量为目的,对培养基和发酵条件进行优化。在对产生的脂肽组分进行分析的基础上,采用高效液相色谱-质谱定量检测法,通过单因素试验和响应面设计优化固态发酵工艺条件。结果表明：利用罗非鱼下脚料为主要基质固态发酵生产的抗菌脂肽组分主要包括表面活性素（m/z分别为995.20、1 008.20、1 058.20）、伊枯草菌素（m/z分别为1 044.30、1 071.20）。优化后的最佳工艺参数为罗非鱼下脚料与麸皮配比3.48∶1（m/m）、初始基质水分含量69.34%（质量分数）、发酵时间61.69 h、发酵温度28.97 ℃、甘蔗渣添加量6%（质量分数）、接种量5 mL/100 g,此条件下抗菌脂肽产量达7.32 g/kg,实际验证结果为7.29 g/kg,相对于优化前提升了7.5 倍,产生的脂肽含有多种脂肽组分。     

副溶血性弧菌ATCC33847在五种食品中代谢产物的溶血活性及对小鼠脏器的毒性差异

研究副溶血性弧菌在食品中代谢产物的溶血活性及对小鼠脏器的损伤。将ATCC33847菌株接种于虾肉、牡蛎、淡水鱼肉、牛肉和蛋炒饭中培养,除菌过滤,以平板溶血法测定溶血活性,以不同剂量的上述滤液灌胃小鼠,测定脏器系数和生化指标。结果显示,染菌蛋炒饭滤液具有最高的溶血活性,但对小鼠脏器的损伤并不强于其它滤液;染菌虾肉和牡蛎肉滤液引起小鼠胃肠系数升高的能力显著高于(p0.05)其他滤液。染菌的五种食品滤液引起ALB、ALP、AST、ALT和BUN指标不同程度的改变(p0.05),其中,虾肉滤液对小鼠肝功能指标的影响强于其他滤液,具有更强的肝脏毒性,而牡蛎和鱼肉滤液表现出更强的肾脏毒性。揭示副溶血性弧菌可能在不同食品基质中会产生不同的毒力因子,对小鼠脏器造成不同的毒效应损伤。