LsrK激酶活力测定反应体系的优化及其稳定性研究

对群体感应淬灭酶LsrK的活力测定反应体系进行优化,测定LsrK的激酶活力和稳定性。以信号分子AI-2为底物,对反应体系中ATP浓度、发光波长和LsrK激酶浓度进行优化,利用Kinase-Glo发光试剂盒测定激酶活力,并在优化反应体系下测定LsrK激酶活力的稳定性。确定反应体系中ATP浓度为3μM,LsrK激酶浓度为15μM,发光波长为560nm;LsrK在30℃条件下,随时间延长,激酶活力逐渐降低,12h时酶活力基本完全消失。为进一步进行LsrK蛋白的功能研究及酶制剂的制备奠定了基础。     

瓶装啤酒隧道式巴氏杀菌的数值模拟

为了保证啤酒的生物稳定性,需要对其进行巴氏杀菌。通过数值模拟瓶装啤酒隧道式巴氏杀菌的过热阶段,考察瓶内冷核(slowest heating zone,SHZ)的位置,分析在不同温度喷淋水条件下瓶内温度分布均匀情况。结果表明:在巴氏杀菌过程中,瓶中啤酒冷核位于1/3灌装高度;瓶内有明显的自然对流现象;当喷淋水温度为61℃时瓶中啤酒温度分布最为均匀,且温度越高瓶内啤酒温度分布越不均匀。     

crtE、crtY、crtI、crtB基因共调控提高β-胡萝卜素产量

代谢合成途径优化的关键在于途径中多个基因表达的调控,本研究使用不同强度启动子对代谢通路中多个相关基因同时调控以提高大肠杆菌β-胡萝卜素产量。将来源于P.agglomerans的4个基因crtE、crtY、crtI、crtB,通过Golden Gate DNA方法与不同强度启动子组合得到质粒库,并转化到底盘细胞中进行颜色筛选。筛选得到crtE、crtY、crtI、crtB启动子组合各不相同的菌株,β-胡萝卜素产量在0.64~8.82mg/g,最高产量比对照提高了65.2%。本研究验证了通过Golden Gate组装建库对代谢通路多个基因同时调控以提高目的产物产量的可行性。     

酶转化三七茎叶总皂苷制备稀有人参皂苷C-K

为了提高三七茎叶总皂苷的利用率和C-K酶转化得率,采用Aspergillus niger sp. G8菌所产酶与Aspergillus niger sp. G4菌所产酶的等体积混合酶(以下简称G8-G4混合酶),研究了酶转化三七茎叶总皂苷进而制备C-K的方法。结果表明,市销的三七茎叶总皂苷中,主要成分是人参二醇类皂苷,其中含量最多的皂苷是Rb3、C-Mx1、Rc和Fc,质量分数分别为26. 38%、14. 28%、12. 73%、10. 25%。G8-G4混合酶的最佳反应条件为45℃、p H 5. 0、底物质量浓度25 g/L、反应24 h。三七茎叶总皂苷经G8-G4混合酶转化后得到4种产物为C-K、C-Mx、Fc、R7,其中C-K的转化得率为32. 7%。     

气相色谱-质谱法测定化妆品中3种防腐剂

建立了同时测定化妆品中2-氯-4-甲氧基苯酚、4-溴-2-甲氧基苯酚和三氯生3种防腐剂含量的气相色谱-质谱法。采用Agilent 6890N-5975气相色谱-质谱联用仪,配DB-5MS色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),对3种型式的化妆品:口红(膏状)、香波(乳状)和化妆水(水状)的样品进行测试。结果表明,检测的相对标准偏差为0.86%~4.49%,平均回收率为92.2%~98.9%,对2-氯-4-甲氧基苯酚、4-溴-2-甲氧基苯酚和三氯生的检出限分别为0.1,0.5及0.1 mg/L。     

紫薯酒发酵过程颜色变化规律及颜色特征

研究紫薯酒发酵过程与颜色相关的花色苷含量、褐变指数、聚合色度、总色度及CIELab(Commission Internationale de L'Eclairage制定的L*、a*和b*测量色值的方法)参数变化规律及其相关性,利用CIELab颜色空间比较紫薯酒与蓝莓酒、红白葡萄酒的颜色。结果表明:发酵过程中,褐变指数和聚合色度呈上升趋势,花色苷含量先上升后略下降;总色度与花色苷含量的变化一致且显著正相关性;亮度L*与花色苷含量和色度的变化相反;色度a*和b*分别与褐变指数、聚合色度呈显著负相关性和正相关性。不同种类的酒样,CIELab颜色空间参数不同,表现出不同的颜色特征。     

液相色谱-质谱法快速检测4 种乳源低聚糖

建立一种乳样经简单预处理后采用超高效液相色谱-串联质谱同时检测4 种重要的乳源低聚糖方法。牛乳及人乳经过脱脂、脱蛋白后经amide液相色谱柱用0.1%氨水-乙腈溶液梯度分离,采用质谱检测。2 种唾液酸乳糖标准品的标准曲线在0.78～50.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）,2 种岩藻糖乳糖标准品的标准曲线在1.56～100.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）。加标回收率在80.00%～100.00%之间,重复性、精密度实验所得相对标准偏差均小于5.00%。     

反胶团萃取鱼精蛋白的初步研究

鱼精蛋白是一种重要的药用蛋白质,初步研究了反胶团法提取纯化鱼精蛋白的过程。结果表明,采用2-乙基己基琥珀酸酯磺酸钠（AOT）/异辛烷体系萃取鲑鱼鱼精蛋白,萃取率接近100%,异丙醇显著强化反萃过程。采用反胶团法萃取纯化鱼精蛋白从技术角度来说是可行的。     

蒙药材止泻木子生物碱的分离与纯化

以夹竹桃科植物止泻木子的干燥种子为原材料,采用乙醇提取法对其生物碱类物质进行粗提取,通过硅胶柱层析和重结晶技术对生物碱粗提物进行分离和纯化。利用核磁共振波谱和质谱法对其一种生物碱单体进行化学结构和分子量鉴定。实验结果表明,用70%乙醇在60℃条件下静止浸取3次,每次提取6 h,得到止泻木子总生物碱提取物,其得率达到0.244%。经过硅胶柱分离和重结晶纯化,可获得3种生物碱单体。对HPLC检测纯度达到94.89%的2号生物碱单体进行核磁共振波谱和质谱检测,得知该生物碱单体是一个分子量为356.59的锥丝碱（conessine）。该结果有利于了解以止泻木子为主要成分的蒙药药剂作用机理。     

离子束诱变与连续驯化选育耐毒性产丁醇菌株

利用离子束注入的方法对丁醇发酵菌株拜氏梭菌（Clostridium beijerinckii） NCIMB 8052进行诱变,筛选得到了突变株拜氏梭菌（Clostridium beijerinckii） CN18,相对于出发菌株,该突变株的丁醇产量从9.9 g/L增加至12.8 g/L,提高了29.3%;总溶剂产量从13.4 g/L增加至18.2 g/L,提高了35.8%。该突变菌株连续传代20次,溶剂产量稳定,菌株无明显退化。使用含木质素降解产物的培养基对该菌株进行连续培养驯化,最终获得一株耐木质素降解产物的高产突变株,命名为拜氏梭菌（Clostridium beijerinckii） CN88,其耐受木质素降解产物的质量浓度提高至1.0 g/L。在0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L的抑制物质量浓度下发酵,可分别产总溶剂15.2 g/L、14.4 g/L、12.7 g/L。