毛细管电泳技术在乳制品营养与安全分析中的应用

乳制品的营养与安全一直广受世界范围内的关注,各种色谱及色谱-质谱联用技术在乳制品分析中得到广泛应用。毛细管电泳技术在乳制品的营养与安全分析中独具特色,成为不可或缺的分析技术。本文围绕毛细管电泳技术分析乳及乳制品中乳糖和半乳糖、胆碱、5’-单磷酸核苷酸、硝酸盐和亚硝酸盐、山梨酸和苯甲酸等小分子化合物的方法,结合本实验室利用毛细管电泳技术参加能力验证等方面的工作,从营养成分、限量物质、残留分析、禁用物质、复原乳识别和能力验证这6个方面,对近10年来毛细管电泳技术在乳制品营养与安全分析中有代表性的应用研究及其进展进行总结,并对其在乳制品中小分子化学物质分析中的发展趋势进行了展望。     

柯萨奇病毒A组16型病毒样颗粒的制备及其免疫原性

目的应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),通过条件优化,提高VLP的表达量,纯化后检测其免疫原性。方法对CVA16结构蛋白基因P1及蛋白酶基因3CD进行密码子优化,插入启动子P10改造为CMV的重组杆状病毒表达载体p Fast Bac Dual-CMV中,获得重组穿梭质粒p Fast Bac Dual-CMV-P1-3CD,转化DH10 Bac TM Competent Cells,提取重组杆粒Bacmid-CMVP1-3CD,转染Sf9细胞,组装成重组杆状病毒Ac MNPV-CMV-P1-3CD,并进行扩增,采用间接免疫荧光法、Western blot法及透射电镜观察对表达产物进行初步鉴定。对重组CVA16 VLP的表达条件(病毒接种MOI值、感染时间及细胞培养方式)进行优化后,通过20%蔗糖垫层及氯化铯连续密度梯度离心法纯化CVA16VLP,并通过腹部皮下注射免疫ICR小鼠3次,采用间接ELISA法检测小鼠血清特异性Ig G抗体滴度,微量中和试验法检测血清中和抗体滴度。结果重组杆状病毒Ac MNPV-CMV-P1-3CD经PCR及测序鉴定证实组装成功;重组CVA16 VLP在Sf9细胞中成功表达,优化的表达条件为:重组杆状病毒Ac MNPV-CMV-P1-3CD按MOI=5接种,Sf9细胞采用悬浮培养方式悬浮培养96 h,收集细胞及培养上清;纯化的CVA16 VLP纯度可达90%以上,针对VP2的单克隆抗体能与VP0及VP2发生特异性反应,电镜下可见大量形态规则的类球形VLP,直径约为27 nm;纯化的CVA16 VLP免疫ICR小鼠后,诱导机体产生的特异性血清Ig G滴度可达1∶105,中和抗体滴度达1∶358。结论应用杆状病毒表达系统成功表达了CVA16的P1和3CD蛋白,并组装形成完整的VLP;通过质粒启动子的改造及表达条件的优化,有效提高了CVA16 VLP的表达量;纯化的CVA16 VLP可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,为CVA16亚单位疫苗的研究提供了参考。     

芬太尼类物质检测方法的研究进展

芬太尼类物质是实验室合成的强阿片类药物,具有成瘾性高、制备简单和变造衍生容易等特点,流入毒品市场后在全球范围内走私和非法滥用 日益严重,且中毒剂量微小,可引起高致死率,对各国的公共健康带来严重威胁.对此,2018年联合国累计规定管制了 21种芬太尼类物质,2019年中国政府对芬太尼类物质实行整类管制,以应对化解食用、注...     

石墨炉原子吸收法测定食品中六价铬

建立食品中Cr(Ⅵ)的测定方法。方法 以10%的盐酸作为浸提液,样品通过微波120℃浸提15min,提取液经Waters MAX小柱(500mg,6cc)分离后用5%氨水淋洗,然后将淋洗液定容,经石墨炉原子吸收法间接测量Cr(Ⅵ)含量。结果 该方法在1～10μg/L的线性范围内具有良好的线性关系,r＞0.999,方法检出限为0.0087mg/kg,回收率均在90.24%～108.06%之间,RSD为3.19%～6.01%。结论 该方法简便、快速、灵敏和准确,适合蔬菜、水果、谷物以及保健食品中Cr(Ⅵ)的检测。