红花檵木两个查尔酮合成酶的克隆及生物信息学分析

为了研究红花檵木花青苷生物合成的分子机制,克隆了红花檵木两个查尔酮合成酶 LcCHSs 基 因,并对克隆的两个基因进行了生物信息学分析。利用 RT-PCR 技术,克隆得到红花檵木 LcCHS1 和 LcCHS2 基因,其中 LcCHS1 的开放阅读框（ORF）为 1 170 bp,编码 389 个氨基酸,LcCHS2 的 ORF 为 1 182 bp,编 码 393 个氨基酸。两个 LcCHSs 的氨基酸序列与来源于茶树（Camellia sinensis）、葡萄（Vitis vinifera）、拟 南芥（Arabidopsis thaliana）、烟草（Nicotiana tabacum）等植物 CHSs 的氨基酸序列一致性超过 83%,且两个 LcCHSs 的氨基酸序列中参与 CHS 酶类催化的 3 个残基（Cys164、His303 和 Asn336）和两段 CHS 酶类重要序 列 (“RLMMYQQGCFAGGTVLR”和“GVLFGFGPGL”）均严格保守,表明 CHS 在进化功能上的保守性。 三级结构预测表明两个 LcCHSs 都能形成同源二聚体,且两个 LcCHSs 蛋白的空间结构非常相似。     

PAB-Gal4-DBD-HA-Twist重组质粒的制备

目的:构建人Twist基因的表达载体pAB-Gal4-DBD-HA-Twist,为研究其转录调控机制提供实验工具。方法:重组克隆质粒pcDNA-Flag-Twist用含有特异BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物进行聚合酶链反应;对含有两种酶切位点的目的 Twist基因片段和pAB-Gal4-DBD-HA载体进行酶切、分离、回收纯化、连接后转入感受态DH5α中,细菌培养,菌落聚合酶链反应、测序鉴定。结果:鉴定结果显示,Twist基因正确克隆到PAB-Gal4-DBD-HA表达载体,并且转入了大肠杆菌中。结论:成功构建了人twist基因PAB-Gal4-DBDHA-Twist表达载体,为进一步研究其表达、调控、作用机制奠定基础。     

氟苯尼考对三疣梭子蟹不同组织中ABC转运蛋白基因(ABCG)表达量的影响

为研究氟苯尼考(FLR)对三疣梭子蟹Portunus trituberculatus不同组织中ABC转运蛋白基因(ABCG)表达量的影响,采用RACE法进行了三疣梭子蟹ABCG基因克隆并对其生物学进行了分析,采用荧光定量PCR法进行了不同浓度(20、40、80 mg/kg)氟苯尼考对三疣梭子蟹肝胰腺、鳃和肌肉中ABCG相对表达量的影响研究。结果表明:三疣梭子蟹ABCG基因全长c DNA序列为2473 bp,共编码578个氨基酸;三疣梭子蟹ABCG不含信号肽,具ABC转运家族蛋白的典型结构域,包括1个高度保守的核苷酸结构域(NBD)和1个疏水性跨膜区(TMD),为半转运子;同源性及系统进化分析表明,三疣梭子蟹ABCG与中国对虾、凡纳滨对虾的ABCG聚为一支,具有较高的亲缘关系;不同浓度的氟苯尼考对三疣梭子蟹肝胰腺、鳃、肌肉中ABCG表达均具有诱导作用,且呈时间剂量效应,由此推测,三疣梭子蟹ABCG蛋白参与氟苯尼考的代谢转运过程。本研究结果可为揭示甲壳动物ABCG转运蛋白对抗生素的转运机制提供参考依据。     

马奶酒样乳杆菌乳糖酶LacZ基因的克隆,原核表达及活性分析

从开菲尔粒(Kefir)中分离出1株马奶酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens ZW3),具有较高的乳糖酶活性,以此菌株为材料,从其基因组中克隆得到LacZ型乳糖酶基因,该基因全长2007 bp,编码669个氨基酸。随后将该基因插入原核表达载体pET-32a中转入大肠杆菌BL21(DE3)进行过量表达,获得了其重组蛋白,纯化后分析了该重组蛋白的乳糖水解活性特点。结果显示,此蛋白在50℃,pH 7.0时乳糖水解活力最高,并在30~55℃,pH 5.0~9.0的范围仍能保持50%以上的酶活力,具有良好的工业应用潜力。     

甘蔗基因克隆的研究进展

甘蔗是我国当前主要的糖料作物,蔗糖业发展是广西的主要经济发展方向,对保障广西经济及农民生活水平具有重大的战略意义。随着基因工程技术的带动,甘蔗抗旱基因克隆对选育抗旱甘蔗品种及定向改良具有重要作用。现从甘蔗抗旱功能基因和信号转导相关基因两个方面全面进行研究总结,以期为甘蔗抗旱育种的基因克隆研究提供参考。     

微生物源纤溶酶基因的克隆及表达研究进展

血栓栓塞性疾病严重危害人类生命和健康,溶栓疗法效果显著。在新型溶栓制剂的研究中,微生物来源的纤溶酶研究引起越来越多的关注。通过分子生物学手段构建重组纤溶酶,实现酶的高效表达已经成为研究热点,本文对微生物来源的纤溶酶基因克隆与表达的研究现状进行了综述。     

柠条锦鸡儿CkLEA1基因克隆及表达分析

植物受到逆境胁迫后,大量逆境响应基因会被诱导表达,LEA蛋白编码基因就是与植物抗旱、抗冷等非生物胁迫密切相关的一类基因。从已构建的柠条锦鸡儿干旱胁迫抑制性削减杂交文库中筛选到了一条LEA蛋白编码基因并进行了克隆。序列比对与系统进化分析显示该基因属于LEA3基因家族成员,命名为CkLEA1(GenBank登录号是KC309408)。克隆得到该基因gDNA长469bp,包含两个外显子和一个内含子;cDNA长357bp,包含300bp的开放阅读框,推导编码99个氨基酸的蛋白质。利用荧光定量PCR技术对CkLEA1基因在各种逆境胁迫条件的表达情况进行初步研究表明,CkLEA1受干旱、ABA、冷、热、盐和碱等处理不同程度地诱导,推测其与柠条锦鸡儿响应逆境胁迫的机制有关。     

真菌聚酮合酶基因的研究进展

由真菌产生的聚酮化合物是一类庞大的次级代谢产物,具有结构和功能的多样性.聚酮合酶是介导聚酮化合物合成的关键酶.大多数真菌聚酮合酶属于重复Ⅰ型PKS,其编码基因通常与聚酮化合物合成的其它相关基因成簇存在.作者论述了真菌聚酮合酶的特性及其基因克隆方法的进展,并对其在后基因组时代的研究进行了展望.     

绿豆环氧化物水解酶基因的克隆、分析及表达

环氧化物水解酶可催化制备高光学纯度的环氧化物及邻二醇等高价值手性药物中间体。本研究采用RT-PCR和THSO-PCR扩增侧翼未知DNA序列技术从绿豆(Vigna radiata)中克隆了一种新型环氧化物水解酶Vr EH3的基因Vreh3,Vreh3编码区DNA序列长度为1 178 bp,包含2个142 bp和79 bp的内含子,以及957 bp的开放阅读框,编码318个氨基酸。Vr EH3的理论相对分子质量和等电点分别为36.2×103和5.59;保守的催化三联体为Asp101-Asp262-His297。将Vreh3与表达载体p ET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组Vr EH3。该酶可对映归一性水解外消旋环氧苯乙烷((R,S)-SO)产生(R)-苯基乙二醇,得率高达79.4%,对映体过量值(e.e.值)为94.7%。