根霉LN-1生物合成天麻素条件研究

以对羟基苯甲醛为底物,探索根霉LN-1生物合成天麻素的最适条件。采用静息细胞转化法,通过分析转化时间、温度、pH值、底物质量浓度等不同因素对转化率的影响,获得了根霉LN-1的最适转化条件为:12 g(湿质量)静息细胞/120 mL转化液,底物质量浓度2.3 mg/mL,pH=5.5,28℃转化24 h。在此基础上,转化液经萃取、硅胶柱色谱分离得到转化产物,通过理化性质和波谱分析鉴定其结构。经HPLC、NMR、EI-MS等测定,证明所得转化产物为天麻素。利用微生物的还原和糖基化作用一步转化合成天麻素,该方法的建立为天麻素的合成开辟了一条新的途径。     

天麻素联合地塞米松保护缺糖缺氧诱导的H9C2细胞损伤

目的：探讨天麻素（gastrodin, GAS）联合地塞米松（dexamethasone, DEX）在缺糖缺氧诱导心肌细胞损伤中的作用及可能机制。方法：建立缺糖缺氧细胞（oxygen-glucose deprivation, OGD）模型,细胞分为5组,即正常对照组（normal group）,缺糖缺氧组（OGD group）,DEX组,GAS组,DEX+GAS组。利用CCK-8实验检测各组心肌细胞活性,利用比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性;利用TUNEL法检测各组心肌细胞的凋亡情况;利用ELISA实验检测各组心肌细胞培养液中炎性因子;利用Western blot检测各组心肌细胞中Notch1、Bax、Bcl-2及Beclin1的表达情况。结果：结果显示GAS与DEX联合使用可显著提高损伤心肌细胞的活性,减少心肌细胞的凋亡;降低促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的产生及促进抑炎因子IL-10的产生,降低LDH的释放;Western blot结果显示GAS与DEX联合使用可促进Notch信号通路中Notch1的表达,显著降低受损心肌细胞中促凋亡蛋白Bax的表达,促进抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进自噬相关基因Beclin1的表达。 结论：GAS与DEX联合使用,可能通过促进Notch信号通路的激活,促进其自噬,提高细胞的活性,抑制心肌细胞的凋亡,减轻炎症反应,从而减轻OGD诱导的心肌细胞损伤。     

天麻提取酒液与天麻渣液态发酵酒的调配酒初探

为开发一种含有天麻素的调配酒,采用固态白酒浸泡的方式提取天麻素得到天麻提取液,并利用剩余天麻渣进行液态发酵酿酒,将天麻提取酒液与天麻渣液态发酵酒按一定比例调配得到一种新型的天麻调配酒。采用单因素及正交试验确定天麻素最佳提取条件,并探究不同调配比例对酒感官的影响。试验结果表明:提取天麻素的最佳条件为提取温度100℃、固液比1:15、提取时间60 min;在液态发酵阶段,添加天麻渣可以提高酒液的酒精度发酵速率,且最佳添加量为8%;天麻提取酒液与天麻渣液态发酵酒的调配比例为1:3,其感官总评分为99分,所得调配酒清亮透明且无悬浮物、香气纯正且有轻微天麻药香、口感酣厚且回味持久。最终证实了利用天麻提取酒液与天麻渣液态发酵酒开发调配酒具有一定的可行性。     

不同炮制方法对天麻素含量的影响

采用薄层层析-紫外分光光度法测定了采用不同炮制方法得到的天麻天麻素的含量。实验发现微波处理的天麻天麻素含量最高，而真空冷冻干燥、热风干燥的天麻天麻素含量依次减少，与传统炮制方法相比较，由这3种方法得到的天麻天麻素含量较高。     

天麻有效成分天麻素提取工艺的优化研究

为了筛选提取天麻素的最优工艺参数和确定工艺条件,比较提取天麻中天麻素的提取方法和提取溶剂,选择超声法及乙醇对天麻素提取。对影响天麻素提取率的提取温度、提取时间、乙醇体积分数、料液比进行单因素实验,并通过正交实验确定天麻素的提取工艺条件,用高效液相色谱定性定量检测天麻素。优化后提取工艺为:提取温度62℃、提取时间37min、乙醇浓度55%、固液比1:18,在最佳提取工艺条件下,天麻中天麻素提取量为6.0548mg/g。     

生物转化体系中天麻素和对羟基苯甲醇同步检测方法研究

目的:建立生物转化体系中天麻素和对羟基苯甲醇同步检测方法.方法:采用反相高效液相色谱法(RPHPLC)对这两种物质的检测方法进行研究.流动相为0.02%磷酸溶液(pH 2.6)-甲醇(二者体积比为5:95),流速0.5 mL/min,柱温35℃,检测波长220nm.结果:在此条件下,天麻素和对羟基苯甲醇线性良好,相关系数均达到0.9999,精密度高(RSD＜5%),回收率在95%～102%之间.结论:本方法可准确地同步测定生物转化体系中的天麻素和对羟基苯甲醇含量.     

高效液相色谱法测定食品中的天麻素

建立了测定食品中天麻素的方法。用水对样品进行超声提取 ,以 ZORBAX SB- C18(5 μm,4 .6× 2 5 0 mm)为分析柱 ,甲醇 - 0 .2 %磷酸溶液为流动相 ,流量 1.0 m L· min- 1 ,检测波长 2 2 1nm。天麻素最低检出限为 0 .6 ng,天麻素进样量在 0 .0 15～ 0 .6 μg范围内呈良好的线性 ,线性关系 r=0 .99993,平均回收率 98.6 % ,RSD=0 .87% (n=6 )。方法简便、快速、稳定、灵敏 ,可作为食品中天麻素的质量控制     

灰树花发酵过程天麻成分变化的HPLC检测方法研究

建立HPLC方法对天麻醇提取物成分及灰树花发酵液进行分析.色谱柱为Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为A:0.1％磷酸水和B:乙腈,以梯度洗脱:0min～35min,B:3％～30％(V/V);35min～45min,B:30％～70％ (Ⅴ/Ⅴ).流速1mL/min,柱温30℃,检测波长221nm.在此条件下,天麻提取液及灰树花发酵液中3种己确定的天麻成分具有良好的分离度,且线性关系良好;精密度高(RSD＜5％);回收率在96％～102％之间,同时检测到经过6d发酵后发酵液中天麻素、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛质量浓度与发酵第0d相比分别下降了46.38％、11.85％和36.75％.该方法可以用于灰树花发酵过程中天麻成分变化情况的跟踪检测,为进一步探明天麻成分与灰树花代谢相互作用打下基础,同时也初步探明了灰树花对于天麻成分的利用情况.     

二极管阵列反相高压液相色谱法测定保健品中天麻素的含量

目的 建立保健品中功效成分天麻素的反相高压液相色谱分析测定方法。方法 样品中天麻素经乙醇加热回流提取、蒸干, 乙腈?0.05%磷酸溶液(5∶95)溶解, C18反相柱分离, 在波长220 nm处检测。结果 此方法的回收率为95.0%~99.4%, 相对标准偏差为0.6%~1.7%。结论 此方法简便快速, 准确可靠, 可用于一些保健品中天麻素含量的测定。     

天麻素抑制H2O2诱导的PC12细胞铁死亡

目的：研究天麻素对过氧化氢（H2O2）损伤的PC12细胞的保护作用及机制。方法：建立H2O2损伤PC12细胞神经损伤模型。MTT法检测细胞活力并确定H2O2最佳造模浓度,筛选和确定天麻素最佳处理浓度。试剂盒检测丙二醛（MDA）、总谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）水平和活力变化;流式细胞仪检测细胞脂质活性氧（ROS）水平;透射电子显微镜观察PC12细胞形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测p53、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）蛋白表达变化。结果：MTT法实验结果显示,50 μmol/L H2O2处理PC12细胞48 h,细胞生长抑制率接近50%;而天麻素（1、5、25 μmol/L）预处理4 h可提高H2O2损伤细胞的存活率,且其作用呈浓度依赖性。MDA、GSH、SOD检测结果表明天麻素降低H2O2处理后的MDA水平,并提高SOD和GSH活力。流式细胞仪检测发现,H2O2损伤后细胞内ROS的含量升高,而天麻素预处理后有效降低H2O2损伤的细胞内ROS的含量。透射电子显微镜观察结果显示,与正常组相比,50 μmol/L H2O2处理后PC12细胞的线粒体脊变厚,线粒体体积变小;天麻素预保护处理后,PC12细胞的线粒体形态趋于正常状态。Western blot结果表明,天麻素预保护后可升高H2O2损伤后GPX4蛋白表达水平,并降低p53蛋白表达水平。 结论：H2O2可通过增加PC12细胞内氧化应激水平引起铁死亡;天麻素预保护后可上调细胞内GPX4蛋白表达和下调p53蛋白表达,从而减少细胞氧化应激产生,抑制细胞铁死亡发生而发挥保护PC12细胞的作用。