人肌红蛋白基因的克隆、表达及其抗体制备

目的克隆、表达人肌红蛋白基因,并制备人肌红蛋白多克隆抗体。方法应用RT-PCR方法从人骨骼肌总RNA中扩增肌红蛋白基因(hMb)编码序列,克隆入原核表达载体pRSETc中,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中诱导表达。表达产物经亲和层析和凝胶层析纯化。纯化蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,并用Westernblot检测其特异性。结果测序表明RT-PCR所得的肌红蛋白基因hMb序列与GenBank(NM203377)中报道的序列一致。该基因在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化,获得电泳纯的蛋白。重组人肌红蛋白的表达水平达12.8%。每升发酵液中可获得纯化的目的蛋白6.438mg。Western blot分析表明该蛋白为融合有6个His的hMb蛋白。ELISA法测得抗体效价为1∶12800,Western blot证实其具有较好的特异性。结论已成功克隆人肌红蛋白基因,在大肠杆菌中获得了可溶性表达,并制备了抗人肌红蛋白的多克隆抗体。     

辐射诱导BEP2D细胞蛋白质表达的改变

利用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,研究与人肺永生化支气管上皮细胞(BEP2D细胞)辐照相关的差异蛋白质,寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标。结果表明,提取样品蛋白进行二维凝胶电泳,找到差异表达蛋白质点约18个,质谱鉴定获得10张肽质指纹图,经数据库搜索后初步鉴定差异表达的蛋白质有7种,即亲环素A、肌球蛋白轻链2、细胞角蛋白9、α-烯醇酶、磷酸丙糖异构酶1、MKRN1、c-myc启动子结合蛋白1。该7种蛋白质与辐射诱导肺癌的发生、发展过程密切相关。     

BEP2D细胞受照前后蛋白质组学研究

本研究利用蛋白质组学技术对受1.5Gy、3Gy γ射线照射的人支气管上皮(BEP2D)细胞和未经照射的人支气管上皮细胞蛋白差异表达谱进行了分析与鉴定。研究结果表明:2-D电泳后在分子量14.4～94kD,等电点3～10范围内分离出约1000多个不同蛋白质斑点。凝胶图象显示1.5Gy的γ射线照射后与对照组相比有15个蛋白点上调,104个下调;3Gy的γ射线照射后有26个蛋白点上调,144个下调;二个不同照射剂量共同表达的差异蛋白点有18个,其中上调的有3个,下调的有15个。通过对选取的10个蛋白点进行质谱分析,有2个蛋白点(样品D和样品660)经检索鉴定为肌球蛋白轻链(MLC)。这些蛋白表达量的改变可能与辐射诱发肺部肿瘤的发生有关,为进一步研究肺癌的发病机理提供了一定的基础。     

^60Coγ射线诱导BEP2D细胞蛋白质表达的改变

利用双向凝胶电泳和质谱技术,研究人支气管上皮细胞（BEP2D细胞）经^60Coγ射线照射后细胞蛋白质表达的改变。结果表明：受照BEP2D细胞蛋白质表达发生了改变,共同差异表达的蛋白质点上调的有3个,下调的有1个;通过质谱分析和数据库检索,有2个蛋白质点（样品D和样品660）经检索鉴定为肌球蛋白质轻链（MLC2和MLC3）,其中MLC2蛋白质的表达量随着剂量的升高而增高。这些蛋白质的高表达可能与辐射诱发肺部肿瘤有关。     

蛋白质组学及其在肺癌研究中的应用

蛋白质组学技术在肺癌疾病研究中的广泛应用,为寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标,以及在辐射防护领域采用蛋白质组学技术对辐射致肺癌进行系统的研究分析奠定了基础。本文介绍了蛋白质组学及其技术平台,以及蛋白质组学在肺癌研究中的应用现状和展望。     

抗-ProGRP单克隆抗体的筛选及其在小细胞肺癌鉴别诊断中的意义

目的 筛选与小细胞肺癌（SCLC）组织胃泌素释放肽前体（ProGRP）抗原具有高亲和力的抗．ProGRP单克隆抗体,探讨抗．ProGRP单克隆抗体在小细胞肺癌临床鉴别诊断中的意义。方法运用免疫组织化学方法筛选高亲和力抗．ProGRP单克隆抗体;利用筛选出的高亲和力抗体分别与SCLC、NscLc、肺良性肿瘤组织切片进行抗原抗体反应,检测ProGRP抗原的阳性表达率。结果抗-ProGRP单克隆抗体V-B3与SCLc组织ProGRP抗原的亲和力最高。21例SCLC组织,阳性表达率为90．5％;28例NSCLC组织,阳性表达率为28．6％;23例肺良性疾病组织,阳性表达率为8．7％。结论应用免疫组织化学方法检测SCAC组织中ProGRP抗原的表达,可以对SCLC进行临床鉴别诊断。