甲型肝炎病毒吕8株的快速适应性培养

用12天35℃初步适应培育出一株在KMB17细胞稳定传代、感染性滴度高、增殖周期短的HAV适应株LU8株，其感染性滴度为108．33TCID50／ml，抗原滴度为1：1024，一步生长曲线试验和免疫电镜观察结果表明12天为该株病毒增殖高峰。LUB株和H2减毒株HAV经纯化和灭活后接种豚鼠，第一次接种后4周血清HAV抗体均阳转，第二次接种后滴度为1：13．5和1：4．8（GMT），第三次接种后滴度增至1：16和1：8。提示LUB株抗原性较H2株强。     

应用核酸探针检测甲型肝炎疫苗的滴度

应用甲型肝炎病毒(HAV)cDNA 片段作为探针,分别以同位素、异羟基洋地黄毒苷配基和生物素标记该探针,对甲肝疫苗病毒培养过程中不同时期、不同接种量的病毒浓度进行了滴定,并以 ELISA 作对照。结果表明,各种标记探针检测的灵敏度均高于 ELISA。而不同标记的探针检测的结果无显著差异。     

接种两针甲肝减毒活疫苗的免疫效果

为进一步提高甲肝减毒活疫苗的免疫效果。我们进行了两针接种的效果观察。选某县农村小学的学生52人，年龄在6～12岁，均未接种甲肝减毒活疫苗或甲肝灭活疫苗，且HAV抗体阴性。采用医科院医学生物学研究所生产的甲肝减毒活疫苗（滴度控制在5．5LogCCID50／ml），按0、3个月免疫程序，每人在三角肌皮下接种两针，每针1ml。第2针接种7天HAV-IgG抗体阳转率为100％，抗体效价主要集中在1：8～1：32之间，占76．92％，GMT为1：14。另随机抽取免前HAV阳性儿童6人，经2针接种后，其中5人抗体增长2倍以上。经两外接种后，局部反应轻微，无发…     

H2株甲肝病毒经KMBl7细胞培养的毒力及核苷酸序列

目的监测H2株甲肝病毒经人胚肺二倍体细胞KMB17培养的毒力／减毒水平及核苷酸序列。方法H2株甲肝减毒活疫苗H2M20K7(K7)用KMB17细胞增殖,分别在35℃和37℃连续传代后,抽查不同代次病毒的普通狨猴接种反应和核苷酸片段序列。结果H2-KMBl7系统在35℃培育16代次过程中,病毒的抗原滴度和感染性滴度稳定,在37℃的滴度明显低下,经13代次仍未达亲本水平。K18(35℃,11代)和K15(37℃,8代)病毒经普通狨猴接种反应证实为减毒性质。核苷酸两片段共1897个碱基的序列分析显示,K18和K15与K7的同源性高达99.3％～100％。结论K7疫苗病毒在KMBl7细胞培养经35℃和37℃连续传代,无毒力回升和遗传稳定性改变。     

普通狨猴的血清酶学分析

目的 探讨实用有效的普通狨猴血清酶学检验方法。方法 常规法分离血清,采用2,4-二硝基苯腙比色法,24 h内测定狨猴血清中异柠檬酸脱氢酶(ICD)活力,IFCC法测定丙氨酸转氨酶(ALT)、草氨酸转氨酶(AST)及γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的活力,平板琼脂糖凝胶电泳测定乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的活力水平,并与国内外相关实验结果进行比较。结果 75只普通狨猴的ALT、AST、γ-CT和ICD活力水平与国内外相关实验结果基本相符,不同试剂等实验条件会造成实验结果出现较大差异。结论 ALT、AST和ICD是甲型肝炎研究中狨猴肝脏损伤的有效指标。采用动物实验前自身对照值是可靠和科学的血清酶学分析方法。     

甲型肝炎病毒恒河猴模型的评估

目的　对国产恒河猴作为甲型肝炎病毒 (HAV)的动物模型做出全面评估。方法　用HAV野型株和H2株减毒HAV感染恒河猴 ,检测分析猴体的各种反应。结果　 14只恒河猴经 4株野型病毒感染后 ,全部血清抗体阳转 ,效价为 1∶2～ 1∶12 80 ,13只猴 ( 92 .9% )的血清酶异常升高和粪便排毒 ,2只猴 ( 14 .3% )有肝脏组织病理学极轻度改变 ;35 2只恒河猴分组接种 6 8批H2株及其子代病毒后 ,血清抗体阳转率为 99.7% ,血清酶异常升高率为2 .8% ,粪便排毒率为 5 8.3% ( 14 / 2 4 ) ,无肝脏组织病理学变化。结论　国产恒河猴是HAV的敏感动物 ,其ALT等血清酶指标能有效反映HAV的强毒或弱毒性质 ,可作为实验动物用于监测甲肝减毒活疫苗株的残余毒力     

不同酶标试剂盒及不同方法检测甲肝总抗体比较

为提高本所甲肝总抗体酶标试剂盒的灵敏度,将原常规法10μｌ血清加样量增大至20μｌ,ＨＡＶ抗体酶标记物量相应调整作为改良法,并比较两法的灵敏度及符合率。选127份血清用Ａｂｂｏｔｔ第2代试剂盒竞争法,即加40μｌ血清和170μｌ酶结合物,检测其抗ＨＡＶ总抗体,抗ＨＡＶ阳性68份,阴性59份;用我所试剂盒常规法检测55份阳性,72份阴性;用改良法检测66份阳性,61份阴性。两种方法检测结果与Ａｂｂｏｔｔ试剂盒的检测结果比较,改良法和常规法的灵敏度分别为971%和809%,总符合率为977%和897%。改良法比常规法的假阳性率高17%,但假阴性率低132%,改…