生物表面活性剂产生菌BYS6的产物特性与稳定性研究

从延长油田采油厂的土样中分离出一株不动杆菌BYS6(Acinetobacter sp.),在以甘油为碳源的培养基中发酵可产生生物表面活性剂,红外光谱检测该产物为糖脂类生物表面活性剂,在25℃室温条件下将发酵培养基表面张力从69.8mN/m降低至32.3mN/m左右。对原油的乳化降粘效果良好,9d后乳化相仍可保持86%。经测定其临界胶来浓度CMC值为70mg/L。该产物性能稳定,在不同温度、pH和矿化度条件下表面活性剂性能保持不变。     

人源溶菌酶基因在杆状病毒系统中的表达

目的在杆状病毒系统中表达人源溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,为其临床应用和大规模生产奠定基础。方法将人工合成的含信号肽和不含信号肽的溶菌酶基因克隆至重组杆状病毒表达系统的载体中,构建重组穿梭质粒,转染sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达,溶菌试验验证表达产物的溶菌酶活性。结果重组克隆质粒PFastBacHTA-signal-lysozyme和PFastBac HTA-lysozyme的PCR产物分别可见444和393 bp的目的基因条带,测序结果证实重组克隆质粒构建正确。PCR结果显示Lysozyme-1、Lysozyme-2、slysozyme-1、slysozyme-2、slysozyme-3、slysozyme-4号重组穿梭质粒可扩增出目的条带。sf9-PHLY和sf9-PHSLY的表达产物经12%SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约17 500和19 300的特异蛋白条带;表达的两种重组蛋白均可与鼠抗6×His单抗特异性结合;表达产物具有溶菌酶活性。结论成功在杆状病毒表达系统中表达了hLY基因,为其临床应用和大规模生产奠定了基础。