大规模纯化脊髓灰质炎病毒的蔗糖垫层离心法的建立

目的建立可大规模纯化脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的蔗糖垫层离心法。方法病毒大量增殖后,收集病毒液,经PEG浓缩、三氟三氯乙烷抽提后,采用蔗糖垫层或Cs Cl密度梯度离心法纯化PV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),电镜下观察病毒形态,进行核酸及感染性滴度的检测。将纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV免疫豚鼠,心脏采血,分离血清,微量中和试验法检测血清中和抗体滴度。结果蔗糖垫层离心法纯化的各型PV,病毒颗粒形态典型,背景清晰,除完整的光滑型病毒颗粒外,还可见大量空心病毒颗粒样品,纯化效果较好;Cs Cl密度梯度离心法纯化的PV样品,病毒形态也较典型,但完整的病毒颗粒较多。两种纯化方法获得的病毒基因组核酸特征显著,背景清晰,无明显差异。蔗糖垫层离心法纯化的各型PV的感染性滴度及免疫后豚鼠血清中和抗体滴度均高于Cs Cl密度梯度离心法。结论蔗糖垫层离心法纯化的PV纯度高,免疫原性好,可用于大规模纯化PV或其他病毒。     

轮状病毒疫苗的研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)是世界范围内引起婴幼儿腹泻的主要病原体。RV疫苗的研制工作已取得了很大进展,但仍存在较大缺陷。目前投入使用的3种RV疫苗虽然能够对重症腹泻起到良好的保护作用,但却不能很好地预防RV感染,因此继续研制新的RV疫苗十分重要。本文对RV及RV疫苗的研究进展作一综述。     

昆明地区成人非细菌性腹泻病原——轮状病毒的电镜观察

婴幼儿急性胃肠炎的主要病原是轮状病毒已经非常明确。近年来,成人急性非细菌性腹泻在我国南北各地均有流行。昆明地区自81年以来每年都在一定范围内发生该病流行。洪涛等报告在成人无菌性腹泻中发现了新轮状病毒。现将我们在昆明地区进行的成人流行性腹泻病原学初步研究结果报告如下: 取肠道致病菌培养结果为阴性的成人急性腹泻患者粪便标本,经4,000rpm离心30分钟,取上清液直接滴膜负染,少量粪沉渣作超薄切片制样,电镜观察。同时从上清液中提取病毒核酸进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。     

流感病毒重配的研究进展

流感病毒是带包膜、基因组分节段的单股负链RNA病毒。其RNA片段在自然感染过程中发生很频繁的重配,造成病毒抗原性,特别是表面糖蛋白HA和NA抗原性的快速变异,使得病毒逃避机体的免疫监视,导致感染和发病,同时给用疫苗预防免疫带来了困难。利用病毒基因片段自然重配(也称传统重配)的特性或反向遗传学技术,筛选自然基因重配或试验基因重配的流感毒株,获得高滴度、减毒、免疫原性和免疫保护效果好的疫苗毒株,对控制人类或动物流感的暴发和流行具有重要的社会和经济意义。本文对流感病毒的传统重配方法和反向遗传学重配方法及其应用的研究进展作一综述。     

A组轮状病毒非结构蛋白NSP2的研究进展

A组轮状病毒非结构蛋白NSP2在病毒复制过程中起重要作用。本文就NSP2蛋白编码基因和基因型、蛋白的表达、结构、功能及其免疫学性质的研究进展作一综述。     

轮状病毒低温传代后生物学特性的研究

本文报道了动物轮状病毒(RV)SA_(11)及 NCDV 株经低温传代后生物学特性变化。这两个毒株分别属动物 RV 第3和第6血清型。本实验室用非洲缘猴肾细胞(BGMK)作为基质,将两株病毒连续传代,选择起始温度36℃,每传10代降低3℃,最终在29℃传20代,总传代数为50代。低温传代后的毒株,血凝活性明显下降,对组织培养感染性在39℃时,冷适应株低于原始株,血清中和试验表明:传代后毒株抗原性稳定,SA_(11)株具有良好的遗传稳定性。NCDV 株在传代过程中第5基因片段发生变异。     

甲醛灭活型间嵌合脊髓灰质炎病毒免疫原性的研究

应用基因工程重组技术构建了脊髓灰质炎型间嵌合病毒xF_(233)(I/Ⅲ型)。经浓缩、提纯及甲醛灭活3天和12天,虽然其细胞感染力已全部丧失,但仍能诱导家兔产生高效价的抗-Mahoney和抗-Leon血清中和抗体。说明xF_(233)有可能作为灭活疫苗的候选株。     

轮状病毒Vp6蛋白的免疫荧光检测

目的检测在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的重组轮状病毒(Rotavirus,RV)Vp6蛋白和RV SA11感染的MA104细胞中不同时间表达的Vp6蛋白及其分布规律。方法应用纯化的重组A组人轮状病毒TB-Chen株Vp6(rVp6)蛋白和RVSA11分别免疫豚鼠,制备抗血清,以抗rVp6豚鼠血清作为检测抗体,应用间接免疫荧光技术检测rVp6蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达。分别用抗Vp6和抗RV SA11豚鼠血清检测Vp6蛋白和RV SA11株在感染的MA104细胞中的分布。结果在轮状病毒感染的MA104细胞和大肠杆菌BL21(DE3)中均能检测到轮状病毒Vp6蛋白。以抗RV SA11血清作为一抗检测感染细胞,比用抗rVp6血清检测具有更强的敏感性。结论免疫荧光试验可用于轮状病毒Vp6蛋白的检测。