表达重组人可溶性TRAIL的毕氏酵母发酵工艺

目的优化rhsTRAIL毕氏酵母工程菌在5L发酵罐中的发酵表达工艺参数。方法研究培养基种类、细胞密度、甘油含量、pH值、甲醇浓度、甲醇流加速率及诱导时间等参数对工程菌生长及目的蛋白表达的影响,并用电镜观察其诱导肿瘤细胞凋亡特征。结果在无机盐培养基中,按10%接种A600=8～12的种菌后,24h酵母菌增殖至A600=76;甘油含量为1%时,菌体生长速度快(A600=160);培养基pH值5.0,甲醇终浓度为1%时,诱导96h表达量最高达到120mg/L,并具有诱导肿瘤细胞凋亡特征。结论rhsTRAIL毕氏酵母的发酵工艺参数为无机盐培养基,pH值5.0,接种10%A600=8～12的种菌,甘油含量1%,甲醇终浓度1%,诱导96h。     

乙型肝炎表面抗原联合rmIL-12诱导的小鼠细胞免疫应答

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)联合重组鼠白介素-12(rmIL-12)对免疫小鼠诱导细胞免疫应答的影响。方法以不同给药方式、不同剂量的HBsAg联合rmIL-12免疫C57BL/6J小鼠,ELISA法检测小鼠血清及脾淋巴细胞中IFNγ及IL-4的水平。结果HBsAg+rmIL-12高剂量组免疫的C57BL/6J小鼠,其脾淋巴细胞IFNγ水平明显高于BALB/c小鼠;3种不同给药方式均可诱导C57BL/6J小鼠血清和脾细胞IFNγ水平明显升高,三者之间差异无统计学意义;HBsAg+rmIL-12高、中、低剂量组免疫C57BL/6J小鼠血清可诱导IFNγ水平明显升高,且呈剂量依赖性,脾细胞IFNγ水平在中、低剂量组均未产生效应,高剂量组明显升高,而对IL-4无明显影响。结论rmIL-12可显著增强HBsAg诱导的细胞免疫应答,并使免疫应答转向Th1型,对于发展治疗性乙肝疫苗具有潜在的应用价值。     

甘南临潭西道堂"乌玛"建筑特色探析

甘南临潭西道堂大房子是中国伊斯兰教早期"乌玛"制度在中国确立并付诸实践的历史见证.该文根据作者的实地调研,总结了甘南临潭西道堂大房子的建筑形态特征与装修特色,分析了大房子建筑特征形成的根源.     

传统山地建筑视觉造型分析

传统山地建筑是人们在长期实践经验的积累下发展起来的一类建筑形式。这类建筑巧妙地利用山地地形来建造,在视觉造型艺术上有着独特的风格和魅力。本文分析了传统山地建筑视觉造型特征,希望对山地建筑创作有所启发。     

理性设计与实践——以重庆南山观景点设计为例

设计过程中包含的语言文字叙述、图表和图像暗示等内容,为设计人员形成创造性思维提供原始材料。设计过程是理性思维的过程,它需综合不同角色的需求,并吸纳设计小组各成员的智慧,以使方案更合理、细致,并能产生更多的创造性思想。     

重组毕氏酵母表达rhs-TRAIL发酵条件的优化研究

为了提高重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(rhs—TRAIL,114-281)在毕氏酵母工程菌中的表达量,采用1000mL摇瓶培养体系,优化研究了在不同培养基,pH值、表达时间、甲醇浓度等培养条件下的表达情况。经条件优化,最终确定了培养基为完全培养基BMGY／BMMY,甲醇浓度为0．5％,pH为6.0,表达时间为96h。在此优化条件下,目的蛋白表达量可以达到68mg/L。     

重组人肝再生增强因子的纯化及生物学活性分析

目的对在大肠杆菌中表达的重组人肝再生增强因子(rhALR)进行分离纯化及生物学活性分析。方法以大肠杆菌DH5α发酵表达重组人肝再生增强因子,经包涵体洗涤、变性、目的蛋白复性,以离子交换、分子筛等技术纯化,并进行一系列检定。结果目的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及柱层析纯化,纯度大于98%,SDS-PAGE测定相对分子质量为30000,MOLDI-TOF-MS测定其相对分子质量为30780·522,N-末端15个氨基酸与理论序列一致。Western blot证实rhALR正确表达,等电点5·85~6·85,氨基酸含量与理论值基本符合。动物实验证实rhALR具有明显的促进CCl4毒性肝损伤小鼠肝细胞修复活性。结论经柱层析纯化的rhALR具有促进小鼠CCl4肝损伤肝细胞修复的活性。     

Pichia酵母表达重组人可溶性TRAIL的纯化与生物活性

目的分离纯化Pichia酵母表达的重组人可溶性TRAIL,并检测其生物活性。方法以Pichia酵母分泌型表达TRAIL,采用硫酸铵沉淀和柱层析纯化可溶性TRAIL蛋白。以SDSPAGE、ESIMS和Westernblot法鉴定其纯度及特异性。以细胞透射电镜、DNALadder和MTT法检测其诱导肿瘤细胞凋亡活性。结果目的蛋白以可溶形式存在,蛋白相对分子质量22000,纯化后纯度95%。Westernblot证实为TRAIL蛋白。电镜、DNALadder和MTT均证实其具有诱导肿瘤细胞凋亡活性。结论Pichia酵母表达rhsTRAIL可用柱层析法纯化,并具有诱导肿瘤细胞凋亡的生物活性。     

浙西球川古镇民居评析

位于浙江省西南部的球川古镇,具有保存完好的古建筑群及深厚独特的人文背景.该文通过调查及测绘,在总揽球川镇概况和总体建筑特色的基础上,以古镇民居建筑为研究对象,通过院落空间特征、建筑艺术格调、地域性建构特点三方面的分析以及典型院落空间赏析,展示球川古镇民居建筑魅力和地域性特色.