SYBR Green实时荧光定量PCR检测大豆转基因成分

采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术,建立了食品中大豆转基因成分的定量检测方法。通过设计特异引物,扩增内源参照基因lectin和转基因靶基因CP4EPSPS,建立两种基因的拷贝数-CT标准曲线,根据标准曲线方程计算样品中的转基因含量,并且通过熔解曲线分析扩增反应特异性。结果表明,lectin和CP4EPSPS基因标准曲线线性关系好,R2值分别为0.9984和0.9953,方法的回收率为95%～110%,检测限为0.01%。本检测方法具有快速、灵敏、准确、特异、高通量等优点,可以作为食品中大豆转基因成分的定量检测方法。     

实时荧光PCR技术快速检测奶制品中掺入的大米源性成分

目的:建立基于实时荧光PCR技术的奶制品中掺入大米源性成分的快速检测方法。方法:以水稻的根部表达基因(gos9)为靶基因设计特异性引物和探针,经特异性实验和灵敏度实验验证引物探针可行性,并经模拟含大米奶粉及市售奶类制品检测验证其实际检测能力。结果:该引物探针体系只针对大米DNA进行扩增,与奶类主成分牛、羊及其它谷类和植物性食物DNA均无交叉扩增;最低能检测到0.1ng的大米DNA,对含大米粉的模拟混合奶粉样品,检出限可达0.1%(W/W)。将其应用于21份市售奶制品样品检测,对含大米源性成分的奶制品扩增阳性,检测结果与食品标签相符。结论:该实时荧光PCR检测体系具有快速、特异、灵敏的优点,可以准确鉴定出奶制品中大米成分,适用于奶类中掺加大米源性成分的检测。     

2013年苏州地区肉及其制品掺假情况调查

了解苏州地区肉及其制品的掺假情况,通过对肉类种源与标签明示肉源进行比对,鉴别摻假食品,为加强食品标签管理提供依据。方法 运用自建的动物源性食品种源判定Taqman实时荧光PCR检测体系对苏州地区的肉及其制品进行种源判定,与标签明示肉源进行比对,鉴别摻假食品。结果 本次调查共检验涉及32个生产单位的90份样品,总不符合率为25.6%(23/90)。检测的44份牛肉及其制品中有12份与标签不符,8份用猪肉部分替代牛肉,1份以鸭肉部分代替牛肉进行销售;此外有3份不含有牛肉成分,存在猪、鸡、鸭源性肉类之外的肉类成分。共检测羊肉及其制品16份,有2份用鸭肉代替羊肉出售,3份羊肉样品中掺入了部分猪成分,其中1份样品还存在单个样品掺杂两种外源肉类的现象(猪源性和鸭源性)。检测猪肉及其制品19份,其中2份样品含有标签未注明的鸡肉成分。在所检测的11份混合肉类样品中有4份成分与标签不符,主要是以廉价的鸡肉取代/部分取代相对高价的牛肉和猪肉。结论 肉制品掺假情况明显,用猪肉、鸭肉部分代替牛肉和羊肉仍是主要的掺假手段,牛肉掺假样品主要是熟制牛肉制品,而火锅食用羊肉卷样品则是羊肉掺假高危品,开展肉制品摻假检测对规范肉制品市场具有积极意义。此外,3份未知种源成分的牛肉样品提示在现有检测基础上还需扩大检测范围,防患于未然。     

苏州地产水生蔬菜和太湖水产品总汞含量分析

通过微波消解-冷原子荧光光谱法检测苏州地产水生蔬菜与太湖水产品的总汞含量,并研究其分布规律。测定结果显示：螃蟹总汞含量最高,其中雄蟹蟹膏部位高达0.470mg/kg,其他水产品包括白鱼、白虾及螺蛳等总汞含量均较低;水生蔬菜除茭白外,均受到不同程度的汞污染,汞含量已超过我国限量标准,其变化呈现浮叶植物高于挺水植物、裸露植物高于有包裹植物的趋势。     

实时荧光PCR技术快速检测食品中的牛源成分

目的:建立基于实时荧光PCR技术的食品中牛源性成分快速检测方法.方法:以牛线粒体细胞色素b为目的基因,设计特异性引物和探针,通过特异性、灵敏性实验,及模拟混合肉样和市售肉制品检测,对该体系进行验证.结果:该牛源荧光PCR检测体系具有很好的特异性及灵敏性,可检测1pg牛源DNA的存在,对于各模拟肉类样品中掺杂的牛源性成分,其检测限低至0.5％,且经市售加工食品验证具有较好的应用能力.结论:所建立的牛引物探针体系具有特异性好、灵敏度高,快速高效等优点,可用于对食品中牛源性成分的掺假鉴别检测.     

油炸猪肉致突变物的研究

用 XAD—2树脂提取在200℃和280℃油温下油炸的瘦猪肉丸外壳致突变物,以沙门氏菌 TA98加 S9活化检测其致突变性。发现200℃和280℃油炸猪肉提取物均具有很高的致突变性。其提取物诱导 TA98的回变菌落数分别为1787个/100gE 和8720个/100gE。进一步用高效液相色谱一紫外光检测法从280℃油炸猪肉中分离鉴定出 IQ、MeIQ和 MeIQ 等 x 三种杂环胺化合物。     

肫片的γ辐照灭菌和检测方法探讨

应用正交试验优化了肫片γ辐照灭菌的前处理工艺，并观察了辐照肫片的保存时间，为肫片的辐照加工提供了切实可行的资料。检测了肫片辐照前后的感官性状、水溶含氮物、游恼氨基酸、挥发性盐基总氮、过氧化值、抗坯血酸消耗量和ＫＭｎＯ４消耗量，除肫片表面发生轻微褐变之外，未发现辐照对上述各项指标有显著性影响，证实了辐照处理肫片用于提高卫生质量和延长保质期是可行的。     

实时荧光PCR法检测奶制品中常见谷物成分

建立Taqman实时荧光PCR法对奶制品中掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物源性成分的初筛检测体系。方法 以常见掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物的叶绿体rbcL基因作为靶基因,通过BLAST软件比对,选择其同源保守区域设计引物和探针。经通用性、特异性、灵敏性试验对探针和引物可行性进行验证,并通过模拟含谷物奶粉及市售奶类制品检测对其实际检测能力进行验证。结果 所建立体系可扩增大米、玉米、小麦、高粱、大麦等常见的谷物掺加物的DNA提取物,与市售奶制品的主成分牛奶、羊奶以及其常见添加物香蕉、红枣、菠萝、草莓、西红柿、花生、大豆等动植物源性成分无交叉扩增(Ct＞35)。对小麦纯DNA提取物检出限为0.01ng。对分别掺加5种谷物成分的模拟奶制品检出限均可达0.5%,对市售的14份奶类食品中的谷类成分的检测结果均与食品标签相符。结论 本研究建立的Taqman实时荧光PCR体系具有通用、相对特异、灵敏、实用等优点,可用于奶制品中掺加或掺杂掺假谷物源性成分的快速定性检测。     

实时荧光聚合酶链式反应法检测食品中猪源性成分

针对猪线粒体细胞色素b基因序列设计特异的引物和探针,建立食品中猪源性成分实时荧光聚合酶链式反应检测方法,并经特异性和敏感性试验验证其可行性。结果表明：该体系可扩增猪肉DNA片段,长度为98bp,其他常见畜、禽肉成分均无法正常扩增。该体系灵敏度低至1pg,且阴性样品扩增后的Ct值限制在35循环以后。对于各模拟肉类样品中掺杂的猪源性成分,其检测限均达1%,经市售加工食品检测验证,表明所建立的猪引物探针体系具有特异性好、灵敏度高、快速、高效等优点,可用于对食品中猪源性成分的掺假鉴别检测。     

X射线诱导人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达上调

应用实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,定量分析不同剂量X射线体外照射对人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达的影响,探讨了运用mRNA水平变化作为电离辐射生物剂量计的可能性。结果表明:经1、2、3、5Gy X射线照射后24h,GADD45和p21基因表达均明显上调。GADD45基因表达在1-5Gy照射剂量范围内呈指数相关。p21基因表达在1-3Gy照射剂量范围内呈线性剂量效应关系,但5.0Gy照射后,其表达不再继续增加。结果表明,X射线照射后人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因的表达在一定剂量范围内呈剂量依赖性上调,GADD45更适合发展为核事故受照射人员的分子生物剂量计。