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假单胞菌的发酵液经过硫酸铵盐析、透析、DEA E-Sephadex A25阴离子交换层析、Sephadex G75凝胶过滤层析等纯化步骤,获得了较纯的酶蛋白。SDS-PAGE凝胶电泳:分离胶12%、压缩胶4%,15m A、30m A恒流电泳后,采用考马斯亮蓝染色和银染色,并用H PLC检测,将蛋白质转移到PV DF膜上,N-端测定10个氨基酸序列。结果表明:SDS-PAGE电泳得到单一条带,H PLC检测活性峰为单峰。该酶在SD S-PAG E上测得的分子质量为32000Da,N-端氨基酸测序结果为APPSNLM QLP。 相似文献
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目的:获得新型β-葡萄糖苷酶编码基因,并对其表达产物进行酶学性质研究。方法:采用宏基因组学方法提取兔盲肠内微生物总DNA,构建DNA文库,通过筛选培养基获得产β-葡萄糖苷酶的克隆,测序获得其插入基因序列,氨基酸多重序列比对分析其序列特征,并用DNS显色法测定表达产物在不同条件下的酶活力。结果:在文库中获得一个基因片段nglu07,能编码一个低分子量的β-葡萄糖苷酶。nglu07基因片段长180bp,编码60个氨基酸残基。与已提交的糖苷水解酶Ⅰ家族成员进行氨基酸多重序列比对表明nglu07具有预测的活性位点Glu4与底物结合位点Tyr47,其最适反应温度为50℃,最适pH为10.0,粗酶活为8.12U/mL。结论:成功获得一新型低分子量的碱性β-葡萄糖苷酶编码基因,其蛋白温度稳定性高,在pH4.0~11.0的环境中均能保持较高的酶活力,具有作为食品工业用酶以及碱性酶的潜力,尤其在食品饮料加工、棉织品生物整理、洗涤及废纸脱墨等工业方面具有一定的应用价值。 相似文献
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以分离筛选、鉴定的假单胞菌为研究材料,提取假单胞菌的基因组为模板基因,设计引物进行PCR扩增.扩增的条件为94℃预变性4min,98℃变性10 s,58℃退火1min,72℃延伸2min,35个循环,72℃复性10min.用试剂盒回收PCR产物,以PGEM-T Easy Vector为载体,产生重组质粒,转化到大肠杆菌(E.coli)JM109细胞中,于LB平板上进行蓝白筛选阳性克隆.提取阳性克隆的质粒,电泳筛选滞后质粒,EcoRⅠ酶切验证后进行测序,检测弹性蛋白酶基因在JM109 E.coli细胞中的表达.结果表明PCR扩增出1.67 kb的基因片段,并成功克隆在E.coliJM109细胞中;挑取白斑提取的质粒,检测有滞后质粒,EcoR Ⅰ酶切检测到3.0 kb的载体和1.67 kb的基因片段;以滞后质粒为模板再次进行PCR扩增,扩增出1.67 kb基因片段,证明该质粒为重组质粒,经上海博亚生物技术公司测序为1.67 kb的基因片段,并在E.coliJM109细胞中表达. 相似文献
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矿山电机车运输自动化的重要内容之一是发展列车安全运行的自动保障系统,以防在司机失去警觉或不在电机车上时发生列车相撞事故。由司机控制列车时,可用以下几种装置避免发生超越色灯信号事件:机车自动信号装置、自动停车装置和带自动停车装置的机车自动信号装置。 相似文献