嗜冷普鲁兰酶产生菌NX-1的筛选及产酶条件优化

从南极海泥样品中分离得到一株产嗜冷普鲁兰酶的假交替单胞菌菌株（Pseudoalteromonas sp.）NX-1。以菌株NX-1为研究对象,对菌株NX-1产嗜冷普鲁兰酶的酶学性质进行了初步研究,并通过单因素试验和正交试验对其产嗜冷普鲁兰酶的最佳培养条件进行研究。结果显示,菌株NX-1所产嗜冷普鲁兰酶的最适作用温度为20 ℃,最适作用pH值为7.0,在最适条件下,酶的半衰期约为120 min;菌株NX-1的最适产酶条件为：培养温度20 ℃、接种量1%、培养基各组分含量分别为蔗糖15 g/L、蛋白胨15 g/L、CaCl2 0.5 g/L、Na2HPO4 6 g/L。优化后菌株产酶可达25.172 U/mL,相比优化前提高25.1%。     

大肠杆菌抗氧化基因突变对内源过氧化氢的影响

为了阐明大肠杆菌(E.coli)抗氧化基因(ahp C/F、kat E/G、oxyR ahp C/F、sod A/B)对细菌内源过氧化氢(H2O2)调控中的协同作用,本研究以E.coli抗氧化基因突变株及其野生型菌株为研究对象,通过紫外分光光度法分析过氧化氢酶活性变化,荧光法检测内源H2O2浓度变化,组织化学法对细胞内H2O2进行定量和定位分析,光密度法分析菌株生长规律。结果表明,与野生型菌株相比,突变体JI367、JI370和AS240生长过程中过氧化氢酶活性总体升高,整个生长周期内H2O2浓度降低,而LC74过氧化氢酶活性降低,整个生长周期中内源H2O2浓度升高;组织化学染色法表明各菌株内源H2O2有显著差异(p<0.05),LC74内源H2O2累积量最多;JI367、JI370和AS240生长迟缓,LC74对数期后期生长速度较野生型快。结果说明,当H2O2浓度累积到高于大约5.4μmol/L时促进E.coli生长,不同的抗氧化基因之间受调控子蛋白OxyR调控存在补偿性表达作用,抗氧化酶Ahp C/F在降解内源H2O2方面起主要作用。本实验为细菌内源H2O2的调控机制的系统研究提供了新的证据。     

硫氧化还原酶热稳定性的结构基础(英文)

The thermostability of three sulfur oxygenase reductases(SORs) was investigated from thermoaci-dophilic achaea Acidianus tengchongensis(SORAT) and Sulfolobus tokodaii(SORST) as well as the moderately thermophilic bacterium Acidithiobacillus sp.SM-1(SORSB).The optimal temperatures for catalyzing sulfur oxida-tion were 80 °C(SORAT),85 °C(SORST),and 70 °C(SORSB),respectively.The half-lives of the three SORs at their optimal catalytic conditions were 100 min(SORAT),58 min(SORST),and 37 min(SORSB).In order to reveal the structural basis of the thermostability of these SORs,three-dimensional structural models of them were generated by homology modeling using the previously reported high-resolution X-ray structure of SORAA(from Acidianus ambivalens) as a template.The results suggest that thermostability was dependent on:(a) high number of the charged amino acid glutamic acid and the flexible amino acid proline,(b) low number of the thermolabile amino acid glutamine,(c) increased number of ion pairs,(d) decreased ratio of hydrophobic accessible solvent surface area(ASA) to charged ASA,and(e) increased volumes of the cavity.The number of cavities and the number of hydro-gen bonds did not significantly affect the thermostability of SORs,whereas the cavity volumes increased as the thermal stability increased.     

银条α-低聚半乳糖的免疫调节作用研究

以银条为原料,通过乙醇浸提与D101大孔吸附树脂初步纯化,制备得α-低聚半乳糖(α-GOS),并采用免疫抑制小鼠模型评价其免疫调节活性.结果表明:银条α-GOS含量为76.39％,主要由蔗糖、棉籽糖和水苏糖组成,其中水苏糖约占总α-GOS的86.03％.银条α-GOS能显著地提高环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠脾脏指数、迟发型超敏反应的耳肿胀度和血清中溶菌酶的活性,且这种变化与银条α-GOS呈现剂量依赖关系.因此,银条α-GOS具有良好的免疫调节活性.     

蜡样芽孢杆菌胶原蛋白酶基因的异源表达与活性分析

研究采用降解骨胶原蛋白的蜡样芽孢杆菌MBL13-U作为原菌种,并对蜡样芽孢杆菌MBL13-U进行全基因组测序,克隆获得胶原蛋白酶(ColM13)基因。将目的基因与大肠杆菌的表达载体pET30a进行连接,转入大肠杆菌宿主菌株BL21,获得降解骨胶原蛋白的工程菌pET30a-ColM13/BL21。通过SDS-PAGE测定异源表达的重组蛋白酶ColM13的分子质量,并测定不同诱导时间和诱导浓度对ColM13酶活性的影响,最终确定重组蛋白酶ColM13的酶活最适条件:6‰异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,100 mmol/L),37℃诱导6 h,优化后酶活力最高为64.99 U/mL,较优化前提高4.24倍。通过水解圈试验、紫外光谱和扫描电子显微镜等方式验证,表明工程菌构建成功,这为我国畜禽骨骼资源的深度开发和综合利用提供了新的研究思路。     

基于OBE理念的食品微生物学课程教学设计

食品微生物学是河南科技大学食品类专业本科生的一门专业核心课程。就工程认证背景下,课程基于OBE的教学设计和成效进行总结。聚焦“以学生为中心,以成果产出为导向进行持续改进”理念,根据毕业要求设置课程教学目标,整合优化教学内容,改革教学模式,合理设计评价体系,推动课程持续改进。实践证明,基于OBE教育教学理念的课程教学设计激发学生的学习兴趣,增强学生学习的主观能动性,提升学生的专业素养及利用课程知识分析解决微生物相关的食品领域复杂工程问题的能力,从而为食品领域高素质应用型人才的培养奠定基础。     

嗜冷普鲁兰酶制备玉米抗性淀粉工艺优化及其表征

以玉米淀粉为原料,采用嗜冷普鲁兰酶脱支处理和压热处理相结合的方式制备玉米抗性淀粉,考察了玉米淀粉乳质量分数、耐高温α-淀粉酶添加量、嗜冷普鲁兰酶添加量、嗜冷普鲁兰酶作用时间对抗性淀粉得率的影响,采用正交试验对压热-酶解法制备玉米抗性淀粉的工艺参数进行了优化。采用扫描电子显微镜、X-射线衍射和差示扫描量热仪对玉米抗性淀粉形貌、晶体结构、热特性进行了观察与分析。结果表明,制备玉米抗性淀粉的最佳工艺条件为：玉米淀粉乳质量分数18%、耐高温α-淀粉酶添加量7 U/g、嗜冷普鲁兰酶添加量10 U/g、嗜冷普鲁兰酶作用时间9 h。在最佳条件下,玉米抗性淀粉得率为16.84%。玉米淀粉经复合酶法处理后,抗性淀粉形成了致密的层状晶体结构,表面形态结构呈现出不同于玉米原淀粉A型晶体结构的V型晶体结构;玉米抗性淀粉的起始温度、峰值温度、终止温度和相变焓值分别为117.07、140.69、153.03 ℃和1 858.12 J/g,均高于玉米原淀粉。     

菊芋提取液的皮状丝孢酵母发酵产油脂试验研究

以皮状丝孢酵母为产油脂菌种,研究其发酵菊糖提取液产油脂情况。首先研究了从菊芋中提取菊糖的条件,获得最适提取条件为:温度85℃,时间80 min,菊芋粉质量浓度70 g/L,在此最优提取条件下,菊糖提取率达95%;然后考察了pH值、接种量、培养温度和氮源对皮状丝孢酵母发酵菊糖提取液产油脂的影响,获得最优条件为:初始pH值5.5、培养温度30℃、接种量10%。在此优化条件下,5 L发酵罐分批扩大培养,其生物量、出油率和油脂得率分别达到13.93 g/L、34.73%和4.89 g/L。补充添加氮源对生物量、出油率和油脂得率的提高不显著。气相色谱法测定脂肪酸成分主要是C16和C18系列,其中80.2%以上是C16:0、C18:1和C18:2,尤其是C18:1(43%),其油酸、棕榈酸和亚油酸占总脂肪酸的比例和植物油脂非常接近。     

一株金黄色葡萄球菌噬菌体SAK84P的分离鉴定

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一类革兰氏阳性致病菌,临床分离株通常对于多种抗生素具有耐药性.从该菌中分离出高效、广谱的专一性噬菌体,对于治疗临床耐药金黄色葡萄球菌的感染具有重要意义.该文以S.aureus K84为宿主菌,从污水中分离出一株烈性噬菌体SAK84P.通过透...