高效液相色谱质谱联用鉴别口服疫苗中硫柳汞降解产物

目的采用高效液相色谱质谱联用的方法鉴别口服疫苗中硫柳汞的降解产物。方法采用C18色谱柱,甲醇-醋酸铵缓冲溶液(pH 4.5)梯度洗脱,以紫外和质谱检测器进行检测,对某口服疫苗中的未知色谱峰进行鉴别。结果疫苗样品中两个色谱峰的保留时间及其一级二级质谱图与硫柳汞的降解产物硫代水杨酸以及2,2’-二硫代二苯甲酸基本一致。结论高效液相色谱质谱联用可鉴别口服疫苗中的硫柳汞降解产物。     

螨变应原点刺制品生物活性测定方法

目的探讨以荧光酶联免疫竞争抑制法(简称Uni CAP法)代替放射性吸附抑制试验(radioallergosorbent test,RAST)测定螨变应原点刺制品生物活性的可行性。方法分别将螨变应原皮肤点刺制品中屋尘螨、粉尘螨点刺液及相应参考品进行系列稀释后,分别与等体积尘螨阳性血清混合,并设阴性对照及100%抑制对照。分别采用γ放射免疫计数器(RAST法)和Immuno CAP 100E全自动过敏原分析仪(Uni CAP法)测定特异性Ig E(s Ig E)浓度,计算点刺样品的生物活性。结果采用Uni CAP法测定结果的RSD值均低于20%。粉尘螨点刺液用两种方法测定的结果基本一致,而屋尘螨点刺液的结果相差较大,但均在标准范围内。结论以Uni CAP法替代RAST法测定点刺液活性具有可行性,可缩短制品的检验时限,并减少了对操作人员及环境的危害。     

23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的研制

目的　研制 2 3价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗。方法　采用 1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、2 0、2 2F、2 3F和 33F等 2 3型肺炎链球菌进行大罐培养和荚膜多糖的纯化 ,制备出 2 3价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗。结果　经检定其主要质量指标均符合欧洲药典 (1997年版 )要求。结论　已建立起较为成熟的培养及纯化工艺 ,具备了规模化的生产条件     

不同来源屎肠球菌的全基因组序列分析

目的 了解不同分离来源的屎肠球菌标准菌株的全基因组特征。     

四株ST9型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的全基因组序列分析

目的 了解不同来源ST9耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的全基因组特征。方法 对收集的4株分离自猪胴体和屠宰工作人员的ST9 MRSA菌株进行全基因组序列测序,分析ST9 MRSA的基因特征、耐药基因和毒力基因携带情况,利用比较基因组学筛选单核苷酸多态性（SNP）,并与NCBI收录的11株不同ST型的MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌菌株进行核心基因分析,构建系统发育树。结果 4株不同来源ST9 MRSA全基因组序列全长约为2.6 Mbp,共含有2 122~2 494个基因,基因组的平均GC含量为32.8%。不同来源菌株基因组中均含有26~31种耐药基因、44~56种毒力基因。4株ST9 MRSA与欧洲主要流行的ST398代表性菌株比较,核苷酸同源性高,菌株之间SNP数量少于300个。系统进化发育树分析结果显示ST9和ST398 MRSA在分子进化过程中分成了不同独立进化分支,家畜和人来源的MRSA菌株在分子进化中没有明显相关性。结论 本研究获得了不同来源ST9 MRSA全基因组基本特征的背景材料,了解了不同ST型MRSA分子进化溯源关系,为后续ST9 MRSA的分子流行病学和致病性机制研究提供科学指导。     

不同解吸附处理对肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量检测结果的影响

目的探讨不同解吸附处理对肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量检测结果的影响。方法将七价肺炎球菌结合疫苗分别用胰蛋白酶、NaOH解吸附或未解吸附处理,十三价肺炎球菌结合疫苗(制品1和制品2)分别用胰蛋白酶、NaOH解吸附(10、30、90 s)处理,应用免疫化学分析系统(IMMAGE 800)测定各型多糖含量。结果除14型外,未经解吸附处理的七价肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量均显著低于经胰蛋白酶解吸附和NaOH解吸附处理后的多糖含量(P<0.05);除23F型多糖外,经胰蛋白酶解吸附处理后的七价肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量均低于经NaOH解吸附处理后的多糖含量。经胰蛋白酶解吸附处理后,制品1中的14型和制品2中的1型多糖含量低于经NaOH解吸附处理后的50%;随着NaOH解吸附处理时间的增加,制品1和制品2中19A型多糖含量急剧下降。结论肺炎球菌结合疫苗进行各型多糖含量检测之前需进行解吸附处理,胰蛋白酶解吸附和NaOH解吸附处理对多糖含量检测结果均有影响。     

变应原疫苗的研究进展

变态反应疾病已成为当今全球关注的重要公共卫生问题。应用变应原疫苗进行特异性免疫治疗为目前变态反应疾病最有效的疗法之一。近年来,随着生物技术的发展,变应原疫苗的研究也取得了相应的进展。本文就变应原疫苗的作用机理、分类及标准化和质量控制的研究进展作一综述。     

金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品的研制

目的 研制金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品。方法 将10株金黄色葡萄球菌和10株阴性对照代表性菌株分别在适宜条件下复苏培养, 制备合适浓度的菌悬液,并加热灭活和分装。随机抽样不同候选参考品样品10支进行均匀性分析,并将样品分别置于2~8℃、25℃、37℃条件下保藏以及反复冻融, 对标准物质的稳定性进行评价。同时对候选参考品的准确性、特异性、重复性、最低检出限分析, 并组织8家实验室进行协作标定。结果 制备了由阳性、阴性、重复性和最低检出限样品组成的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用候选参考品。结果显示不同候选参考品样品的均匀性与稳定性良好, 特异、重复性好;除P6阳性候选参考品样品不能被部分试剂盒检出,其余阳性参考品样品均能成功检测、最低检出限为1.0×103个/mL。协作标定结果也进一步表明阳性、阴性、重复性和最低检出限候选参考品均符合国家参考品的各项要求。结论 研制的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品已获得批准, 可用于金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒的质量控制和评价。     

粪肠球菌核酸检测试剂国家参考品的研制

目的 研制粪肠球菌核酸检测试剂国家参考品。方法 将9株粪肠球菌和8株非粪肠球菌参考品候选菌株分别在各自适宜的培养条件下培养,收集新鲜培养物进行计数、灭活、稀释和分装,并对参考品进行均匀性和稳定性评估。组织3家实验室对研制的参考品进行了协作标定。结果 研制了由9份阳性候选参考品、8份阴性候选参考品、重复性参考品和最低检出限参考品组成的粪肠球菌参考品。经评估研制的参考品均匀性及稳定性良好,协作标定结果显示阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、重复性参考品均符合要求,参考品最低检出限为1×10_³ 个/mL。结论 研制的参考品可用于粪肠球菌核酸检测试剂的质量评价。     

铜绿假单胞菌注射液体外抗肿瘤生物活性检测方法的建立

目的建立铜绿假单胞菌注射液(Pseudomonas aeruginosa,PA-MSHA)体外抗肿瘤生物活性检测方法。方法将系列稀释的PA-MSHA在体外直接作用于人肝癌细胞BEL-7402,光学显微镜下观察细胞的生长状态;MTT比色法检测其对细胞增殖水平的影响;对10批PA-MSHA成品分别检测3次,以半数抑制浓度(IC50)为指标,计算批内和批间变异系数(CV),验证方法的精密性。结果随着PA-MSHA稀释度的降低,光镜下贴壁的BEL-7402细胞数量逐渐减少,细胞皱缩并破碎;MTT比色结果显示,随着PA-MSHA稀释度的降低,孔内颜色逐渐变浅,BEL-7402细胞增殖抑制率逐渐升高,呈一定的剂量-效应关系;10批PA-MSHA成品3次检测的IC50值范围为(3.584～7.778)×108个/ml,批内变异系数为4.58%～24.17%,批间变异系数15.08%～16.95%,总变异系数为15.81%,均符合细胞实验变异系数应小于30%的标准;PA-MSHA成品经该方法检测后,得到的IC50值在(3.109～7.383)×108个/ml范围内时,表明成品的生物活性合格。结论建立了PA-MSHA体外抗肿瘤生物活性检测方法,该方法稳定性好、精密性高,而且具有操作简便、节约成本和时间等优点,可用于对PA-MSHA以及其他类似细菌类生物制品的体外生物活性研究。