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[摘 要]目的 克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因。方法 用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB,测定其DNA序列,将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pETCaiB,转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L异两基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果 克隆得到的肉碱脱水酶编码基因 caiB长度为 1221bp,与文献报道值相比,DNA序列有26个不同,氨基酸序列只有一个不同,即302位的丙氨酸变为苏氨酸。重组菌经IPTG诱导,可高效表达,SDS-PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000,表达产物含量占菌体总蛋白45%以上。结论 得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌,为制备L-肉碱创造了条件。 相似文献
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目的 克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因。方法 用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB,测定其DNA序列,将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET-28a( )中,构建表达质粒pETCaiB,转化大肠杆菌BI21(DE3),用1mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果 克隆得到的肉碱脱水酶编码基因caiB长度为1221bp,与文献报道值相比,DNA充列有26个不同,氨基序序列只有一个不同,即302位的丙氨酸变为苏氨酸,重组菌经IPTG诱导,可高效表达,SDS-PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000,表达产物含量占菌体总蛋白45%以上。结论 得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌,为制备L-肉碱创造了条件。 相似文献
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通过对市场经济条件下企业融资成本与效益的比较分析,引用现代资本结构理论结合我国企业融资现状,讨论了不对称信息条件下企业融资契约的选择和破产成本对企业资本结构的影响,并对我国资本市场的协调发展提出了几点建议。 相似文献
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范立强 《金属材料与冶金工程》1994,(4):46-48,51
对湘钢近年来冶金焦的硫含量对高炉炼铁及生铁质量影响进行了统计分析与讨论,认为降低焦炭的含硫量一方面要组织低硫含量的单种煤,另一方面要合理配煤。同时还介绍了不同配煤方案及效果。 相似文献
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目的摸索工程菌的表达条件并分离纯化,获得高活性的重组人SOD2/3杂合酶(rhSOD2/3)。方法利用含有质粒pET-28a-SOD2/3的工程菌诱导表达rhSOD2/3,考察诱导温度、诱导剂浓度、Mn2+浓度与加入时机对重组酶表达量与活性的影响;利用金属螯合亲和层析纯化rhSOD2/3。结果重组酶的表达量占菌体总蛋白40%~50%,最佳表达温度15℃、诱导剂浓度0.5 mmol/L,Mn2+浓度2.5 mmol/L,表达时间16 h,亲和层析能较好的纯化rhSOD2/3,比活从粗酶液220 U/mgpr提高到930 U/mgpr以上。结论成功获得了rh SOD2/3最适的表达条件及纯化方法。 相似文献
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在改进微量连苯三酚法的基础上,对其操作方法作适当的改进,采用二次线性回归法处理实验数据,通过OOP(面向对象的程序设计)实现数据处理的微机化,并探讨了这种超氧化物歧化酶活力测定及数据处理方法的条件和可靠性。 相似文献
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目的 克隆表达EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,并检测其生物活性.方法 PCR扩增出apopfin序列,与表达载体EC-SOD3-Pet-28a连接后在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,表达产物进行Ni2+-NTA纯化和MIT活性检测.结果 表达载体Pet-28a-EC-SOD3-apoptin经酶切鉴定和序列分析,证明质粒构建正确,转化E. Coli BL21(DE3)后,重组蛋白获得表达,Ni2+-NTA纯化后的凋亡素融合蛋白纯度达到85%以上,经噻唑蓝(MTT)法测定具有活性.结论 成功构建了表达载体Pet-28a-EC-SOD3-apopfin,并在大肠杆菌中表达了EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,纯化的蛋白质具有诱导HeLa细胞凋亡的能力. 相似文献
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目的 克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因,分析其活性包涵体.方法 提取土豆总RNA,以反转录获得的cDNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),扩增得到土豆环氧化物水解酶基因,构建大肠杆菌表达质粒pET-REH,将重组表达质粒pET -REH转化E.coli BL21(DE3).结果 SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度下均主要以包涵体形式表达,只在15℃有微量可溶表达.酶活性分析表明,28℃表达的重组酶包涵体酶活性性为0.7 U/mg.结论 初步证实了存在活性包涵体的观点. 相似文献
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