美味牛肝菌胞外多糖的分离纯化及组分分析

主要对美味牛肝菌发酵产生的胞外多糖(BeBEP)进行了分离纯化和组分的分析。方法:采用DEAE-纤维素柱层析和SephadexG-100凝胶柱层析对BeBEP进行分离纯化,得到的主要成分BeBEPⅢa,用紫外光谱和醋酸纤维素薄膜电泳方法进行纯度鉴定,红外光谱进行结构分析,高效液相色谱法分析单糖组分。结果表明:BeBEPⅢa为均一组分,存在吡喃糖苷,由D-木糖、D-甘露糖和D-半乳糖三种单糖组成,摩尔比为3.1∶63.3∶1.0,其中主要以D-甘露糖为主。     

胡萝卜多糖与维生素E抗衰老作用比较研究

目的:研究胡萝卜多糖对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用.方法:对小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖制造衰老模型小鼠,采用维生素E和不同剂量的胡萝卜多糖对小鼠灌胃处理.结果:胡萝卜多糖能显著提高小鼠血清、肝、脑中SOD、CAT的含量,降低小鼠血清、肝、脑中MDA的含量,提高小鼠血清、肝、脑T-AOC(总抗氧化能力);高、中剂量的胡萝卜多糖效果与一定量维生素E效果相当.结论:胡萝卜多糖有一定的抗氧化作用,从而起到抗衰老作用.     

小分子苦瓜多糖MCPⅡa的纯化及结构分析

利用酶解结合水溶醇沉提取水溶性的苦瓜多糖（Momordica charantia polysaccharide,MCP）,经Sevag法除蛋白、DEAE-纤维素离子交换、Sephadex G-100凝胶过滤获得活性多糖MCPⅡa。由高效凝胶渗透色谱检测可知MCPⅡa为均一多糖,平均分子质量为13.0 kD,单糖组分分析显示其单糖组成为鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖和阿拉伯糖（各组分物质的量比为12∶3.05∶19.89∶5.95∶56）。傅里叶红外光谱、核磁共振及刚果红实验发现其存在C1、C2、C3、C5连接,在水溶液中具有稳定的β-三股螺旋构象,扫描电镜下显示其为菱形晶体颗粒。     

Mn-SOD的纯化方法研究

以嗜热芽孢杆菌B．S110—2所产Mn—SOD为研究对象,对其纯化方法进行了研究,用碱处理的方法替代了传统的硫酸铵分级沉淀蛋白的方法;通过对金属螯合层析中二价金属离子的选择及洗脱液pH的选择,初步建立了一套适合分离纯化Mn-SOD的金属螯合层析体系,为实际生物产品的分离奠定了基础。     

胡萝卜多糖硫酸酯化修饰及其抗氧化活性研究

采用水提醇沉法提取胡萝卜粗多糖,经Sevage法与木瓜蛋白酶相结合法除蛋白后,以DEAE纤维素柱层析分离纯化得到具有抗氧化活性的多糖组分。用浓硫酸法对其进行硫酸酯化修饰,经红外光谱比和硫酸钡比浊法定性定量分析多糖酯化率。研究结果表明:当硫酸取代度为18.4%,即硫酸酯化率为2.94时硫酸酯化胡萝卜多糖的抗氧化活性比未修饰多糖增加1.5倍。     

酶解玉米蛋白粉制备抗氧化肽

以玉米蛋白粉为原料,2709碱性蛋白酶为水解酶,采用正交实验设计优化水解条件,用NBT法和D2-脱氧核糖法测定水解所得玉米肽的抗氧化活性。结果表明,制备玉米抗氧化肽的最佳酶解条件为:pH9.5,E/S=10%,时间4h,温度55℃,该条件下制备的玉米抗氧化肽对O2-·和·OH有很强的清除作用,清除率分别为54.42%和82.31%。     

苦瓜多糖的分离纯化及保肝活性研究

采用DEAE-52及葡聚糖凝胶G-100柱层析获得了具有抗氧化活性的苦瓜多糖(MCP)组分,通过构建小鼠四氯化碳肝损伤模型探讨了苦瓜多糖对肝损伤的防护作用。研究结果表明,纯化后的苦瓜多糖对超氧阴离子自由基清除率达82%,并能使肝损伤小鼠血清中的ALT和AST活性下降幅度分别达到10.6%及30.7%,肝匀浆中SOD、GSH-PX活性上升幅度分别为33.33%和26.62%,MDA含量则下降了25.62%。提示苦瓜多糖对肝损伤具有一定防护作用,保肝活性与海王金樽相近。     

苦瓜多糖的抗氧化活性与降血糖作用相关性研究

采用DEAE-32及葡聚糖凝胶G-75柱层析获得了具有抗氧化活性的苦瓜多糖组分,通过饲喂四氧嘧啶构建小鼠糖尿病模型,探讨了苦瓜多糖的抗氧化活性与降血糖作用的相关性。结果表明,纯化后的苦瓜多糖在20mg/mL时对羟自由基(.OH)清除率可达82%。随着苦瓜多糖体内抗氧化活性增加,其对小鼠血糖升高抑制作用也显著增强,当多糖浓度达到250mg/kg时,降糖效果与格列本脲相同。     

绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)基因克隆与表达

绿色木霉Sn-9106是一株分解纤维素能力较强、能利用秸秆固体发酵生产纤维素酶的工业菌株.通常丝状真菌纤维素酶合成受纤维素、槐二糖等的诱导.本研究利用秸秆粉诱导绿色木霉Sn-9106纤维素酶基因,在诱导3.5d时,纤维素酶组分之一——葡聚糖内切酶Ⅰ的mRNA转录达到峰值,收集菌丝提取总RNA,以单链cDNA为模板,PCR扩增获得编码葡聚糖内切酶Ⅰ基因(egl1),去除信号肽序列后构建重组质粒PET-egl1,实现其在大肠杆菌中的表达,所得重组葡聚糖内切酶经组氨酸标签亲和层析纯化得到单一的E-GI蛋白,SDS-PAGE检测为49ku,活力为2.37U/mL.     

产耐热纤维素酶菌株的分子鉴定及产酶条件优化

从温泉热源地区采集的水样中筛选出1株60℃生长的纤维素酶产生菌NR615。通过ITS序列及系统发育进化树的分析表明该菌株为烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。该菌株在28～60℃生长较好。对菌体及产酶条件进行优化得出:初始pH6.5,碳、氮源分别为结晶纤维素、牛肉膏时有利于产酶。其产生的纤维素酶的最适反应温度65℃,最适pH5.0,且在50～70℃有一定稳定的活性。经过响应面分析优化培养基,发酵5 d时活力达到2.411 3 IU/mL。这些特征表明,该菌株是1株性能良好的耐热纤维素酶生产菌株。