Magnetospirillumsp．AMB-1菌株培养及磁小体形成条件的研究

本文通过改变基础螺菌培养基中琥珀酸添加量、氮源、铁源种类及含量以及培养条件,观察各因素对Magnetospirillumsp．AMB-1生长量及磁小体形成量的影响．单因素实验结果表明：其最适生长温度为30℃,pH为6．9,250mL锥形瓶中装液量为70％,在添加0．80g琥珀酸、并以0．12gNaNO3为氮源、2．0μmol／L奎尼酸铁为铁源的基础螺菌培养基中按2％的接种量,静置培养4d后,趋磁细菌的吸光度可达0．853A,磁小体的形成量Cmag值为1．673．     

黄酮类活性成分的分离提纯

研究了酶转化芦丁产物异槲皮甙的分离提纯。酶反应产物用硅胶柱层析法提取，可以得到高纯度的异槲皮甙。通过高效液相色谱检测纯度，结果表明异槲皮甙转化率为70％，纯度为90％以上。通过核磁共振测定，确定此酶反应产物是异槲皮甙。     

毛细管电泳检测发酵液中1,3-二羟基丙酮方法的建立

建立了利用毛细管电泳(CE)技术快速、准确检测发酵液中1,3-二羟基丙酮含量的新方法。所用熔融石英毛细管规格为50μm×60 cm(有效长度为45 cm),分离电压为24 kV,缓冲液为pH9.5的30 mmol/L硼砂缓冲溶液,200 nm处检测DHA。结果表明,DHA标准样品的迁移时间为8.3 min,在100μg/mL～1 000μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.999 5),加样回收率为97.79%,RSD为1.81%。测得以甘油作为底物发酵产DHA发酵液中DHA含量为3.220g/L,此方法可有效应用于产DHA发酵过程中产物的检测。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因克隆及在毕赤酵母中分泌表达

为大规模制备β-葡萄糖苷酶,构建重组酵母工程菌,实现β-葡萄糖苷酶的分泌表达。根据已报道黑曲霉(Aspergillus niger)β-葡萄糖苷酶cDNA序列设计一对引物,采用RT-PCR扩增,获得黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl)。构建了pMD-18T-bgl克隆载体,bgl亚克隆到质粒pPIC9K,构建表达载体pPIC9K-bgl。经BglⅡ线性化后电转入Pichia pastoris GS115,经过MD、YPD/G418平板筛选阳性克隆,获得分泌表达重组P.pastoris GS115的工程菌。用终体积分数1%的甲醇对其进行诱导表达,SDS-PAGE和酶活测定结果表明,重组毕赤酵母分泌了1个相对分子质量约90 000的蛋白质,与该酶基因产物的理论值一致。酶催化的最适温度为50℃,最适pH 5.5,其酶活达到38 U/mL,比已报导重组酶产酶水平有较大程度的提高。     

添加氧载体促进林可霉素发酵过程的研究

为了有效的改善林可霉素发酵液中的氧传递速率,研究了氧载体对林可霉素发酵的影响。结果表明,正十二烷作为氧载体的效果较好,能有效提高林肯链霉菌发酵合成林可霉素的能力。在发酵开始的第24 h添加4%的正十二烷,在摇瓶和发酵罐中发酵,可以分别提高林可霉素的效价26.3%和28.8%。     

β-葡萄糖苷酶纳米凝胶非水相合成红景天苷

为了高效制备红景天苷,采用水相原位聚合的方法制备β-葡萄糖苷酶纳米凝胶作为催化剂,以葡萄糖和酪醇为底物,在非水相体系中通过逆水解合成红景天苷。对酶纳米凝胶的耐受性以及影响合成红景天苷的多种因素如反应体系的有机溶剂种类、含水量、加酶量、pH、温度和底物浓度等作了考察。实验结果表明:由于酶纳米凝胶能够有效增强酶的热稳定性和有机溶剂耐受性,非常适合β-葡萄糖苷酶逆水解合成红景天苷反应的进行;优化后的合成条件表明以叔丁醇作为有机溶剂,反应体系含水量为5%,加酶量4.0U/m L,体系pH6.0,反应温度60℃,葡萄糖和酪醇的浓度分别为300mmol/L和900mmol/L,经过96h的反应,红景天苷浓度为71.13mmol/L,收率达到23.7%。本研究提供了酶法合成红景天苷更高效的新方法。     

酶法原位分离技术制备葡萄糖酸

研究了使用聚乙烯醇-海藻酸钠固定化的葡萄糖氧化酶-过氧化氢酶作为催化剂,在鼓泡式反应器中采用原位分离技术转化葡萄糖制备葡萄糖酸的过程。研究发现,该转化过程受到产物的抑制作用,通过对树脂的筛选,采用对葡萄糖酸具有较好吸附效果的D335树脂,可以解除产物的抑制作用。结合流加补料的转化方式,葡萄糖酸的转化率可以达到95.5%。连续使用4个批次,其平均转化率在85.7%以上,系统的稳定性较好。     

超声波-酶法联合提取绞股蓝总黄酮及其抗氧化活性的研究

本文研究了绞股蓝中总黄酮的高效提取和抗氧化性能。先使用纤维素酶和果胶酶分别处理样品后,再利用超声波进行提取的方法所获得的总黄酮的得率最高,可以达到0.498%。对提取总黄酮的抗氧化性研究表明,绞股蓝总黄酮对于DPPH自由基和羟基自由基清除能力较强,在实验所选浓度范围内,总还原能力随浓度增加而增强。