大鼠吸入氡及其子体后的DNA损伤效应

研究氡及其子体对大鼠外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)、肺细胞、支气管肺泡灌洗液(Bronchi alveolar lavage fluid, BALF)细胞以及脾和胸腺细胞DNA的损伤作用。雄性SD大鼠吸入氡及其子体的累积剂量分别为66、111、174工作水平月(Working level month, WLM)后,收集BALF细胞,制备肺、脾脏和胸腺组织的单细胞悬液,采用单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis,SCGE)技术,检测细胞DNA链的断裂改变。结果表明, 大鼠吸入氡及其子体后,各照射组PBMC、BALF和肺细胞DNA链断裂的迁移长度显著增加(p<0.01)。其中, PBMC与肺细胞DNA损伤有相关性(r =0.887, p<0.01),直线拟合(R2=0.787)的回归方程为Y=0.978X-0.12。在本实验的照射剂量下,氡及其子体能引起PBMC、BALF和肺细胞的DNA链断裂的损伤。     

γ射线照射C6、SGH-446与NCI-H446肿瘤细胞的三维结构变化和DNA辐射损伤

脑胶质瘤是常见恶性肿瘤,我国脑胶质瘤发病率占脑肿瘤40％以上,占全部肿瘤的1％-3％,由于血-脑屏障作用,神经胶质瘤对射线并不敏感,放疗的治疗比值较小,化疗也不理想。寻找神经胶质瘤细胞的耐辐射基因,探讨其耐辐射机制,可望为脑胶质瘤放疗增敏提供指导,提高患者术后的生存率。本研究用小鼠脑胶质瘤(C6)、人脑胶质瘤(SHG-44)和小细胞肺癌(NCI-H446)等细胞株、     

线粒体DNA减少在氡及其子体致人支气管上皮细胞凋亡中的作用

使用溴化乙锭(Ethidium bromide,EtBr)诱导方法构建线粒体数目减少支气管上皮细胞(Human bronchia epithelia with mitochondrial DNA knock-down,ρ?HBE)模型并进行长期氡照射,用克隆形成法测定氡照射后HBE细胞的增殖能力,用流式细胞仪进行细胞凋亡和线粒体膜电位的检测。结果发现,氡照射后,与线粒体DNA数量正常的HBE细胞(ρ+HBE)相比较,ρ?HBE细胞存活分数明显增高,虽然早期凋亡率明显低于正常细胞,但是总凋亡率增加,同时线粒体膜电位也显著降低。结果提示,氡照射后引起的线粒体减少HBE细胞增殖能力提高与总凋亡率的减少有关,并且与线粒体膜电位的变化相关。     

维生素D对60Co辐射损伤小鼠的保护作用

为研究维生素D对基因组稳定性作用,观察维生素 D 对60Co 辐射损伤小鼠外周血象、骨髓嗜多染红细胞(Polychromatic erythrocytes,PCE)微核率和骨髓有核细胞(Bone marrow cells,BMC)细胞周期和凋亡的影响.使用60Co辐射制备损伤模型,维生素D制剂(阿法骨化醇胶丸)灌胃,观察外周血象、PCE 微核率(Giemsa法)的变化,并用流式细胞仪分析BMC细胞周期和凋亡情况.结果显示,小鼠辐射后外周血白细胞、血小板数显著下降,骨髓造血损伤,染色体损伤,而维生素D能在一定程度上促进外周血象的恢复,抑制微核率的发生.流式细胞仪分析表明,辐射后 24h,维生素D干预组,BMC的G0/G1期细胞比例较辐射损伤组明显减少,G2期和S期细胞较辐照组增多.这说明维生素D可能成为-个新的辐射防护剂.     

激光扫描共聚焦显微镜观察细胞在丝素纤维织物上的生长情况

利用激光扫描共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope，LSCM）技术，用活细胞荧光示踪剂标记细胞，观察细胞在天然丝索纤维和再生丝索纤维上的生长情况。用含10μmol／L Cell—Tracker CM-Dil（Molecular Probes Company）的尤血清RPMI1640培养液，室温标记V79．333和原代心肌细胞30min，接种于Glass Bottom Dish中，将两种受试材料分别放入Glass Bottom Dish中，继续培养。在加入受试材料后1．2．3．4、5，7天，利用LSCM技术，采用双通道同时扫描的方式，一个通道的激发波长为5341ma，发射波长为540—650nm，另一个通道使用微分干涉差成像技术，动态观察细胞在再生丝素纤维受试材料的生长情况。实验发现V79细胞和3T3细胞在天然丝素纤维上是接种后5天明显增多，在再生丝素纤维上生长数量是接种后4天明显增多，而且比在天然丝素纤维生长的数量多。原代心肌细胞在天然和再生丝素纤维上生长得非常少。     

激光扫描共聚焦显微镜在骨髓基质细胞移植中的应用

目的：探讨激光扫描共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope,LSCM）技术在骨髓基质细胞（Bone Marrow Stromal Cells,BMSCs）移植中的应用。方法：使用活细胞示踪剂CM-DiI、细胞核探针DAPI和DNA合成前体物BrdU体外标记BMSCs,移植到动物模型体内,利用LSCM技术,观察BMSCs在受体组织内的分布和分化。结果：体外标记BMSCs后再移植到受体,使用LSCM技术可以观察到BMSCs定位于受体心肌组织和脑组织,并有部分BMSCs表达相应的组织特异性蛋白Cx43和GFAP。结论：利用LSCM技术观察BMSCs在受体组织内分布和分化是一种简单可行的方法。     

1,25(OH)2D3和γ射线对人卵巢癌细胞SKOV-3的联合作用

为探讨活性维生素D(1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25(OH)2D3)与γ射线联合应用对SKOV-3细胞增殖的影响,评价1,25(OH)2D3能否增强γ射线对SKOV-3细胞的抑制作用,将实验分为1,25(OH)2D3组,60Coγ射线组以及两者联合作用组和对照组,用MTT法测定细胞抑制率,并用...     

WORT增强γ射线对SHG44细胞周期及凋亡的影响

研究渥曼青霉素（Wortmannin，WORT）对人脑胶质瘤细胞辐射增敏作用及诱导细胞凋亡。用克隆法、流式细胞术和激光共聚焦显微镜扫描技术检测细胞克隆形成、细胞周期和凋亡以及凋亡的形态学特征。结果表明：WORT能抑制细胞克隆形成，和^60Coγ射线联用抑制作用增强，表现出协同作用。WORT和^60Coγ射线联用能引起SHG-44细胞G1期阻滞，WORT能增强^60Coγ射线诱导的细胞凋亡，凋亡细胞核固缩和核碎裂，可见凋亡小体。以上结果表明，WORT可能通过诱导细胞G1期阻滞和凋亡途径来增加细胞的辐射敏感性。     

流式细胞术检测大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能方法探讨

目的:比较不同实验条件对检测肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响,为流式细胞术检测肺泡巨噬细胞吞噬功能筛选快速、灵敏、稳定的实验方法。方法:支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,将肺泡巨噬细胞分别与转红色荧光蛋白基因质粒细菌〔E.coliDH5α(pJZ402rfp)〕及未转质粒细菌(E.coliDH5α)孵育,并选择〔E.coliDH5α(pJZ402rfp)〕与肺泡巨噬细胞按不同的细菌与细胞比例(50:1、100:1、200:1)、孵育时间(30min、60min、120min、180min)及培养溶液(PBS、Hanks、无血清1640)进行孵育,流式细胞仪检测肺泡巨噬细胞的吞噬功能。结果:E.coliDH5α(pJZ402rfp)具有稳定的红色荧光,用E.coliDH5α(pJZ402rfp)检测肺泡巨噬细胞的吞噬功能比用E.coliDH5α获得更多的参数。肺泡巨噬细胞的吞噬率随着细菌与细胞比例的增大而增加,而吞噬指数在细菌与细胞比例为100:1时为最高(P0.05);肺泡巨噬细胞的吞噬率从30分钟到120分钟变化不大,但到180分钟吞噬率有明星的降低(P0.05),吞噬指数则在60分钟时最高,有显著差异(P0.05);Hanks液组肺泡巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数显著高于PBS组及1640组(P0.05)。结论:在室温(260C)以肺泡巨噬细胞与E.coliDH5α(pJZ402rfp)比为1:100的Hanks液中孵育1小时,是流式细胞术检测肺泡巨噬细胞吞噬功能的快速、灵敏、稳定的实验方法。