PEEK-HA生物复合材料对MG-63细胞的作用

体外培养成骨MG-63细胞,通过倒置荧光显微镜和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法,研究聚醚醚酮-磺化聚醚醚酮-羟基磷灰石(polyetheretherketone-sulfnated polyetheretherketone-hydroxyapatite,PEEKSPEEK-HA)复合材料对细胞形态和增殖的影响.在PEEK-SPEEK-HA复合材料质量浓度为4 mg/mL时,复合材料对MG-63细胞增殖作用最强,随浸提液质量浓度增大,材料对细胞增殖作用下降.材料质量浓度为4 mg/mL时,HA质量分数为20%的PEEK-SPEEK-HA复合材料对细胞的增殖作用较强.PEEK-HA和PEEK-SPEEK-HA复合材料的毒性评级为1级,无细胞毒性.SPEEK和HA能够改善复合材料对成骨MG-63细胞的黏附作用,HA含量对细胞黏附作用的影响更显著.扫描电镜结果表明MG-63细胞在PEEK-SPEEKHA材料上生长形态为三角形或长梭形,有伪足,伸展状态良好,细胞可以在材料缝隙处生长,表明成骨细胞能够在该材料表面黏附、伸展和生长.将SPEEK引入PEEK-HA复合材料能抑制细胞凋亡.     

迷迭香抗氧化提取物的应用研究

以迷迭香为原料采用有机溶剂萃取法提取其中的抗氧化成分Rao,用碘量法检测了Rao对油脂(猪油、豆油)的抗氧化作用,结果表明,Rao具有较强的抗油脂氧化性能。另外,用滤纸片法和平板培养法研究了Rao的抑菌作用,结果证明,Rao对常见致病菌(枯草芽孢杆菌、金色葡萄球菌、大肠杆菌)有较强的抑(杀)菌作用,对霉菌也有一定的抑制作用。     

迷迭香抗氧化提取物的应用研究

本文以迷迭香为原料采用有机溶剂萃取法提取其中的抗氧化分为Rao，用碘量法检测了Rao对油脂（猪油，豆油）的抗氧化作用，结果表明，Rao具有较强的抗油脂氧化性能。另外，用滤纸片法和平板培养法研究了Rao的抑菌作用，结果证明，Rao对常见致病菌（枯草芽孢杆菌，金色葡萄球菌，大肠杆菌）有较强的抑（杀）作用，对霉菌也有一定的抑制作用。     

PSTI1可提高大肠杆菌应答胁迫能力

指出含典型34肽重复序列结构域(tetratricopeptide repeat,TPR)的胁迫诱导蛋白(stress-in-ducible protein-1,STI1)是真核生物特有的一类与胁迫应答有关的分子伴侣蛋白.作者从多头绒泡菌分离出一个STI1类似蛋白cDNA,因其编码蛋白含有两个非典型的TPR结构域,命名为PSTI1.为了解PSTI1对原核生物胁迫应答功能的影响,观察表达PSTI1的大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)与原菌株的增殖差异,发现PSTI1表达菌耐受盐、渗透压、重金属离子、氧化、缺氧和酸碱变化胁迫的能力均增强,但对高温敏感.PSTI1保守结构域TPR1能提高E.coli耐受渗透压胁迫的能力,但TPR2会使E.coli对盐和渗透压胁迫敏感,说明TPR1和TPR2在PSTI1调控胁迫应答中可能扮演不同角色.通过pull-down和质谱分析技术检测了与PSTI1作用的E.coli蛋白,发现PSTI1能与E.coli的HtpG(Hsp90)、La蛋白酶和过氧化氢酶HpII等作用,说明PSTI1具有原核生物非典型TPR结构域蛋白的类似功能,是类似STI1的胁迫应答蛋白.     

PEEK/HA生物复合材料对3T3成纤维细胞的影响

体外研究PEEK/HA生物复合材料对3T3成纤维细胞的影响,评价该材料的生物相容性。制备不同HA含量的PEEK/HA和PEEK/SPEEK/HA生物复合材料,与3T3成纤维细胞共培养,倒置相差显微镜观察该材料对细胞形态影响,MTT法研究该材料对细胞增殖作用,评价细胞毒性,流式细胞术研究该材料对细胞凋亡的影响,扫描电镜观察该细胞在材料表面黏附形态。细胞呈长梭形贴壁生长,胞体透明,大部分呈梭形和多角形,生长态势良好。随着浸提液浓度增大,材料对细胞增殖作用显著下降,PEEK/HA复合材料随着HA含量增加,细胞增殖作用逐渐增强,PEEK/SPEEK/HA复合材料与PEEK/HA相比,对细胞增殖作用较强,细胞毒性级别为Ι级,说明该材料对3T3细胞无毒性。细胞凋亡率随PEEK/SPEEK/HA材料中的HA含量升高而降低。SPEEK的加入使PEEK/HA复合材料后黏附率增大,随PEEK/SPEEK/HA中HA含量增加,细胞黏附率增加,SPEEK和HA可改善材料的黏附性能。SEM观察发现3T3细胞能够在PEEK/SPEEK/HA复合材料表面黏附、伸展和生长。PEEK/SPEEK/HA复合材料生物相容性良好,为该人工骨替代材料的临床前研究提供实验数据和科学依据。     

原代培养的正常人宫颈鳞状上皮细胞超微结构

原代培养的正常人宫颈鳞状上皮细胞超微结构刘士德，陈莲凤，闫伦飙，宋国兴，司静懿，李昆，麦永嫣（中国医学科学院基础医学研究所，北京１００００５；北京医科大学妇儿医院）原代培养细胞作为研究模型已引起人们广泛重视。但由于人正常宫颈鳞状上皮细胞的原代培养存在...     

多头绒泡菌G2期cDNA表达文库的构建

cDNA表达文库是分离、筛选基因的重要平台.为分离多头绒泡菌SC35类似蛋白PSCL32.5及其激酶的基因,首先检测多头绒泡菌PSCL32.5及其激酶在细胞周期不同时相的含量,发现PSCL32.5在G2期含量最高; 再从多头绒泡菌G2期RNA出发,构建多头绒泡菌G2期cDNA表达文库.得到cDNA文库的初始滴度为1.22×106 pfu/mL(pfu为噬菌体数目),cDNA扩增文库的滴度为1.12×1011 pfu/mL,插入片段的重组率接近100%,插入片段的大小在0.5～2.5 kb范围,说明所构建的cDNA文库质量较好.     

菌多糖对Balb/c 3T3、Hela、HEK-293细胞增殖的影响

用苯酚法提取JM109大肠杆菌、O157大肠杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌及多头绒泡菌的菌多糖,用MTT法检测菌多糖在体外对Balb/c 3T_3(鼠成纤维细胞)、Hela(人上皮细胞)和HEK-293(人胚肾细胞)增殖的影响.结果表明,菌多糖在低质量浓度(低于40mg/L)时抑制Hela细胞和HEK-293细胞的增殖,但促进Balb/c 3T_3细胞的增殖;菌多糖超过一定质量浓度(80mg/L)时,对Balb/c 3T_3细胞的增殖作用和对Hela、HEK-293细胞增殖的抑制作用趋于饱和.     

采用酵母双杂交法筛选PSRPK相关蛋白基因

本课题组在前期研究中,从多头绒泡菌中分离到一个SR蛋白激酶基因psrpk,并将其编码蛋白命名为PSRPK(SR protein kinase ofPhysarum Polycephalum).为分离PSRPK相关蛋白基因以了解PSRPK的功能,构建了转化率为2×106转化子/3μg pGADT7-Rec、密度为5.35×108cells/mL、滴度为2.34×109cfu/mL的多头绒泡菌酵母双杂交AD库.以PSRPK为饵蛋白筛选该文库得到接合率为41.18%的杂交酵母,在SD/-Leu/-Trp/-Ade/-H is培养板上筛选获得1476个杂交克隆,其中,X-gal滤纸显色呈强蓝色的克隆有342个.对大于500 bp的67个克隆测序获得35个cDNA片段,其中编码Plasm in C、branched-chain am inoacid am inotransferase(BCAT)类似蛋白、MSF1类似蛋白、m ixed-linked glucanase precursor类似蛋白、FCY1p类似蛋白和40S ribosomal protein S2类似蛋白等7个cDNA片段在阳性杂交酵母克隆中出现多次,其余仅出现一次.在35个cDNA片段的编码序列中有15个具有同源蛋白,31个编码序列的丝氨酸含量大于或等于6%,符合激酶底物的组成特征.     

人胰岛素和胰岛素原单克隆抗体制备及分析

应用杂交瘤技术获得针对胰岛素和胰岛素原的各4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞.其中4株分泌胰岛素单克隆抗体的细胞(NI1、NI7、NI13、NI15)所分泌的抗体亚型均为IgG1;分泌胰岛素原单克隆抗体的细胞株所分泌的抗体亚型分别为IgA(NPI1)、IgG1(NPI3、NPI5)和IgG2a(NPI9);所有抗体的轻链均为κ型.所制备的胰岛素原单克隆抗体均不与胰岛素和C肽交叉反应,但所有胰岛素单克隆抗体均与胰岛素原交叉反应.