猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆、高效表达与鉴定

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)VR2332株ORF7的全长基因序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR扩增出完整的ORF7基因,并将PCR产物克隆至pMD-18T载体进行测序分析.双酶切测序后重组质粒pMD-18T-N得到目的片段连接至原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-N....     

基于荧光定量PCR的兔毛定性检测方法

建立一种特异、灵敏的兔毛定性检测方法,并对方法进行评价,为准确有效检测兔毛方法的建立提供依据。文章针对兔线粒体COXⅠ基因序列进行引物探针设计,经Blast软件对相似序列搜索后,筛选出一套最优与常见禽畜无交叉反应的引物;采用常见动物纤维鸭绒、鹅绒、绵羊毛、山羊绒、牦牛绒、羊驼毛DNA进行特异性实验;对提取的兔毛DNA梯度稀释后分别进行荧光PCR扩增,确定检测方法的灵敏度;对引物进行3次重复性试验,验证其重复性。结果表明:设计的针对兔线粒体COXⅠ基因的引物及探针仅对兔毛有扩增,而对其他对照及阴性对照均无扩增。该荧光PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可以快速准确地定性检测纤维制品中的兔毛成分。     

山羊绒DNA的提取及验证

提取DNA是利用PCR技术检测纤维的关键技术难点。本文对山羊绒DNA的提取方法进行了试验,并通过PCR扩增的方法进行验证。结果表明:使用Ta Ka Ra Mini BEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.5.0试剂盒,将纤维样品尽量处理成粉末状,并在样品经裂解液处理后先离心除去其中尚未完全溶解的纤维,然后进行PCR扩增是比较有利的,完全能够得到满足PCR扩增要求的DNA样品。