巯基微球协助重组γ-猪肝酯酶包涵体体外复性

猪肝酯酶（PLE）是一种广泛应用于光学活性醇或羧酸合成的水解酶。大肠杆菌异体表达为大规模生产猪肝酯酶γ同工酶提供了可能,但表达过程中会形成包涵体,需经体外重折叠恢复其生物活性。针对γ-PLE含二硫键的特点,制备了三种不同巯基负载量的功能聚合物微球SG-DTT（6.1 μmol·g^-1、25.2 μmol·g^-1和143.4 μmol·g^-1）,将其应用于协助γ-PLE包涵体体外复性,并考察了微球浓度、pH、温度和尿素浓度对复性效果的影响。复性过程需要适宜的氧化还原环境,较高的巯基负载量微球协助复性效果较好,当γ-PLE浓度为1000 μg·ml^-1时,微球协助复性后γ-PLE的活性可达到1885 U·L^-1,比对照组提高了72%。研究表明,巯基微球能有效促进二硫键的正确配对,阻止蛋白分子间的聚集,是一种新型高效的复性添加剂。     

反应萃取耦合法分离1,3-丙二醇中缩醛反应的研究

研究了用反应萃取耦合法分离1,3-丙二醇过程中的关键反应一缩醛反应。考察了反应温度、反应时间、催化剂以及乙醛加人量对反应过程的影响。结果表明,在强酸性树脂催化下,通过乙醛与1,3-丙二醇可以发生可逆缩醛反应生成2-甲基-1,3-二噁烷,得到了可逆缩醛反应的最佳反应条件。当反应温度为55C．反应时间在15min左右,根据反应的特点．首次采用了强酸性树脂和硫酸分段催化．乙醛与1,3-丙二醇摩尔浓度比为3：1时．萃取液中1,3-丙二醇的转化率最高,其总转化率约为90．02％。     

高压CO_2和乙醇协同沉淀法从牛乳中分离蛋白质的研究

以CO2 为沉淀剂 ,乙醇为CO2 助溶剂 ,考察了高压CO2 和乙醇对牛乳中蛋白质的协同沉淀作用。结果表明 :牛乳中蛋白质的沉淀存在着临界温度和临界压力 ,分别为 3 2℃和2 76MPa ,当体系高于这个临界温度和临界压力时对沉淀过程有利 ;CO2 和乙醇对牛乳中蛋白质的沉淀具有双重作用 ,在水体系中加入乙醇既有助于增加CO2 的溶解度 ,也可以使沉淀的临界温度和临界压力降低     

强化两相混合的超临界技术制备聚乳酸微粒

针对商品化聚乳酸微球粒径分布较宽难于适用气溶胶给药要求的不足,采用水力空化混合强化超临界流体辅助雾化技术(SAA-HCM)制备聚乳酸(PLA)超细微粒.该技术主要特点是通过在超临界流体和液相进料处引入水力空化混合器,强化两相间的混合.考察SAA-HCM过程混合器压力、温度、沉淀器温度、进料中CO2与液体溶液质量流量比和溶液质量浓度等操作参数对微粒形态和粒径分布的影响,成功制备出球形度较好,粒径分布较窄(1～3μm)的PLA微球.经X射线衍射(XRD)分析和差示扫描量热(DSC)分析显示,与原料PLA相比,微球晶型及热曲线变化不大,但结晶度下降.同时把操作参数与相行为进行关联,探讨了影响颗粒形貌的机理.对比超临界流体辅助雾化法(SAA)的实验结果表明:水力空化的引入能有效强化混合器内的两相传质,混合更好,能制备出适用于气溶胶给药要求的超细微粒.     

一种碱性蛋白酶在高压CO2-水-乙醇体系中的稳定性

基于超(近)临界流体抗溶剂沉淀法分离与纯化蛋白质的发展，酶以及蛋白质的稳定性是一个关键因素。本工作以碱性蛋白酶粗品(由地衣芽孢杆菌2709发酵生产)为目标蛋白，考察了其在不同CO2压力的作用下，在水-乙醇溶液中的稳定性情况，并进一步探索了酶活降低的原因，寻找保持酶活的办法。实验中所用CO2压力为0～7MPa，温度为35℃，乙醇浓度为0％～20％(wt)。实验结果表明，在一定的实验研究范围内，杂蛋白沉淀出来的同时，碱性蛋白酶可以保持80％以上的相对酶活。实验结果为超(近)临界CO2沉淀法分离与纯化碱性蛋白酶提供了技术保障。     

一种新型生物微胶囊制备方法

对多组分新型生物微胶囊———SA/NaCS CaCl2/PMCG微胶囊的制备进行了研究,考察了SA质量分数、NaCS质量分数、PMCG质量分数及成膜时间等主要因素对微胶囊性能的影响。实验结果表明SA和NaCS存在最佳质量分数,分别为1.5%和2.5%;随着PMCG质量分数增加及在PMCG中反应时间的延长,微胶囊膜越厚,机械强度则先增加后降低。最终得到膜层较薄、机械强度高、物化性质稳定的中空微胶囊,为其应用奠定了基础。     

重组蛋白的体外复性技术研究进展

概要介绍了重组蛋白体外复性的意义,该技术的难点及现有复性方法的局限性.并重点阐述了色谱复性和分子伴侣体外复性技术的原理、特点及在基因工程药物生产过程中的应用,结果表明新型重组蛋白复性技术可将复性收率提高至80%-100%,有望解决基因工程产业化的关键技术.     

气体抗溶剂结晶法制备柠檬酸微细颗粒

建立了一套气体抗溶剂结晶的实验装置,考察了不同操作条件下（温度、水含量、进料浓度）二氧化碳压力对柠檬酸丙酮溶液的溶解度的影响规律,并得到了柠檬酸晶体,对比了条件变化对晶体颗粒的粒径大小和分布的影响。     

重组人γ-干扰素包涵体稀释复性

采用稀释法研究了重组人γ-干扰素包涵体复性条件,如温度、pH值、蛋白浓度、复性液中脲浓度,同时对加样操作方式进行了考察,得到了较为适宜的复性条件.结果表明,脲能有效地抑制复性过程中蛋白质的聚集,合适的脲浓度随复性蛋白浓度的增加而有所增大,在4℃、pH值8.0、脲浓度1.0mol•L^-1、蛋白浓度0.1mg•ml^-1及脉冲加样操作方式等条件下,复性后重组人γ-干扰素的活性为2.39×10⁵ IU•ml^-1,比活达2.21×10⁷ IU•mg^-1.