皱褶假丝酵母产脂蛋白酯酶的发酵条件优化及性质研究

皱褶假丝酵母经发酵培养可合成分泌脂蛋白酯酶,对该菌种进行了发酵条件的优化,其最适培养基条件为:pH值6.0,250mL三角瓶中装量25mL,所接菌种种龄为24h,接种量为10%,摇床转速为200r/min,28℃培养27h。酶学性质研究结果表明,该酶的最适温度为45℃,最适pH值为7.5。     

短杆菌属产胆固醇氧化酶的发酵条件优化

短杆菌属(Brevibacterium sp.)是胆固醇氧化酶高产菌,对其进行底物诱导及发酵条件的优化,其最适培养基为蔗糖0.3%,酵母膏0.2%,蛋白胨0.3%,牛肉膏0.3%,K2HPO4 0.1%,MgSO4 0.05%,pH6.8。最适培养条件为接种量5%,24℃培养20h,通气量为50mL培养基/250mL三角瓶,200r/min。结果表明,胆固醇氧化酶的酶活力可达到2439U/L,比未优化前195U/L提高了12倍。在pH6.5和温度54℃条件下测得酶米氏常数Km值为7.1×10-5 mol/L。     

聚乙二醇化重组人红细胞生成素在动物体内的作用

目的 研究聚乙二醇化重组人红细胞生成素(PEG-rhEPO)在动物体内的作用。方法 经动物皮下注射后比较PEG-rhEPO与普通rhEPO在网织红细胞百分数(RET％)、用药频度、肾性贫血纠正以及对病模动物的保护作用。结果 PEG-rhEPO组网织红细胞百分数升高持续时间可达7d以上,而rhEPO组只能达到4d;在周剂量(0.08μg/只)相同的条件下,PEG-rhEPO每周给药1次小鼠红细胞比容(HCT)增高15.3％,与rhEPO每周给药3次的HCT增高13.4％效果相当,而与rhEPO每周用药1次的HCT增高6.0％有明显差异。在病模大鼠的贫血治疗实验中,PEG-rhEPO不仅每周1次给药能达到rhEPO每周3次给药的效果,而且对患病大鼠的死亡保护作用也远优于rhEPO。结论 PEG-rhEPO作用时间持久,用药次数少,纠正贫血效果明显,保护效果良好。     

两步固态法发酵降解山黧豆毒素的研究

从保存的菌种中筛选到B_2和B_(13)2株菌,通过2步固态发酵,在山黧豆培养基中先接菌株B_2培养3d (37℃),灭菌后再接菌株B_(13),培养3d(37℃),灭菌后用0.2 mol/L的HClO_4在0～4℃提取1h,然后利用2,4-二硝基氟苯(FDNB)为柱前衍生试剂,通过高效液相色谱(HPLC),检测了对照和处理中α,β-草酰氨基丙氨酸(ODAP)的含量及降解率。结果发现,对照中β-ODAP和α-ODAP平均含量分别为1.146 mg/g和0.653 mg/g,处理中β-ODAP和α-ODAP的平均含量分别为0.203 mg/g和0.0909 mg/g,处理中的β-ODAP和α-ODAP比对照中的β-ODAP和α-ODAP的平均含量降低了82.2%和86%,而且发酵后处理的蛋白含量明显高于对照。     

酵母菌产甘油激酶的发酵条件优化

筛选得到产甘油激酶（GK，EC2、7．1．30）德巴利酵母菌，对其发酵条件进行了优化，确定其最适培养基配方为葡萄糖0．1％，KCl 0．18％，酵母膏0．3％，柠檬酸0．6％，甘油0．5％。最适培养条件为接种量6％，装液量为120mL／250mL，160r／min、31℃培养25h。在最适培养基及最适条件下，甘油激酶的酶活力可达1.19U／mg。     

胆固醇酯酶高产菌株的筛选及动力学性质研究

通过平板初筛和摇瓶复筛,得到一株胆固醇酯酶的高产菌株,研究了pH值、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对胆固醇酯酶酶促反应速度的影响。研究发现,胆固醇酯酶有较好的酸碱稳定性,pH值为5.0￣8.0;最适pH值和最适温度分别为pH7.0和40℃,该酶的动力学研究表明,对胆固醇亚油酸酯和胆固醇油酸酯都表现为典型的米氏规律,Km值分别为2.2×10-5mol/L3.1×10-5mol/L,同时研究了一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响,发现Mg2+、EDTA对胆固醇酯酶有激活作用。     

重组人促红细胞生成素聚乙二醇修饰及纯化研究

目的　研究重组人促红细胞生成素 (rhEPO)聚乙二醇修饰条件及纯化方法。方法　用SDS PAGE分析不同反应条件对产物成分的影响 ;用红细胞压积法测定各组分的体内生物学活性 ;用分子筛柱层析进行纯化。结果　rhEPO的修饰度随蛋白浓度、蛋白与PEG2 NHS活性酯质量比的增加而提高 ,体内生物学活性随修饰度增加而降低 ,分子筛柱层析纯化效果好。结论　确立了rhEPO聚乙二醇化的影响因素及纯化方法     

胆固醇氧化酶的发酵条件及酶学性质研究

Brevibacterium sp．可以发酵生产胆固醇氧化酶,实验中对该菌种进行了底物诱导及发酵条件的优化, 确定其最适培养基为(%)：蔗糖0．3,酵母膏0．2,蛋白胨0．3,牛内膏0．3,K_2PO_4 0．1,MgSO_4 0．05,pH6．8。最适培养条件为：接种量5%,24℃培养20h,通气量为50mL 培养基/250mL 三角瓶,200r/min。在最适培养基及最适条件下,胆固醇氧化酶的酶活力可达到24．01U/mg,比未优化前1．71U/mg 提高了14倍。该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适 pH 为6．5,最适温度为54℃。在最适 pH 和温度条件下测得该酶 km 值为7．1 ×10~(-5)mol/L。     

Rhodococcus sp.发酵条件及其胆固醇酯酶的部分性质

Rhodococcussp.经发酵培养可合成分泌胆固醇酯酶。对该菌种进行诱导及发酵条件的优化,确定其培养基为(%):蛋白胨1.3,KCl 0.5,牛肉膏0.1,Na2HPO40.632,MgSO40.06,油酸0.4,卵磷脂0.25,Triton X-100 0.16;最适培养条件为:pH7.4,250 mL三角瓶中装量40 mL,接种量6.0%,摇床转速180r/min,30℃培养24h。在最适培养基及最适培养条件下,胆固醇酯酶比活力可达到5.47 U/mg。酶学性质研究结果表明,该酶的最适温度为40℃,最适pH为7.0。     

HPLC测定不同方法提取的山黧豆中β-ODAP

利用2,4-二硝基氟苯(FDNB)为柱前衍生试剂,建立了测定山黧豆中毒素β-Ν-草酰基-α,β-二氨基丙酸(简称β-ODAP)及其无毒性的异构体α-N-草酰基α,β-二氨基丙酸(简称α-ODAP)的恒组分洗脱高效液相色谱方法。并优化了流动相的pH、乙腈含量以及柱温。得出最佳色谱条件为:C18,250 mm×46 mm,5μm;流动相∶乙腈/溶液A(17∶83,体积比;溶液A的配比是K2HPO4:二甲基甲酰胺:水为0.03 mol∶10 mL∶990 mL,并用冰醋酸调pH为5.5);流速1.0 mL/min;检测波长360 nm;柱温28℃。利用该方法比较了水提取法、30%乙醇提取法及0.2 mol/L高氯酸提取法的优缺点。结果发现:水提取法和0.2 mol/L高氯酸提取法效果相当,水提取法和30%乙醇提取法均耗时长,需要24 h,而耗时长会不可避免的导致β-ODAP向α-ODAP的转换,且30%乙醇提取法不如水提法和高氯酸提取法效果好。而0.2 mol/L高氯酸提取法耗时短,只需要在0℃～4℃下提取1 h。