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目的 为了获得大量重组人血管内皮细胞生长因子( Human Vascular EndothelialGrowth Factor, hVEGF),以研究其在心血管和药学领域具有的潜在药用价值。方法 用PCR方法扩增目的基因hVEGF165,连接到 pET-3a载体上,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,建立可高效表达的pET-3a/hEVGF165重组质粒,经IPTG诱导表达, Western blot检测表达产物的抗原性,通过 Mono Q阴离子层析和FPLG Superose12分子筛柱层析,进行初步纯化,用 MTT法检测其生物学活性。结果 pET-3a/hEVGF表达产物经纯化后,其纯度可达到90%以上,表达的rhEVGF165能 呈剂量依赖性地促进人静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖。结论组建了天然形式hEVGF165的大肠杆菌菌株,并摸索 出一套纯化工艺,为大规模生产重组hEVGF165奠定了基础。 相似文献
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