四株狂犬病街毒的免疫学特性

目的 研究国内分离的4株狂犬病街毒的免疫学特性。方法 采用免疫力试验及中和试验进行抗原性及免疫原性检测。结果4株街毒抗原性存在一定差异，应用aG株疫苗免疫小鼠能保护4株街毒的攻击。结论aG疫苗与4株街毒具有良好的交叉免疫性。     

狂犬病病毒核衣壳抗原诊断试剂盒实验室内的质控方法

目的探讨狂犬病病毒核衣壳抗原诊断试剂盒实验室内质控方法。方法以ELISA双抗体夹心法检测狂犬病病毒抗原为例,采用“Levey-Jennings”和“即刻法”质控法进行对比。结果“Levey-Jennings”质控图中所有测定结果均处于“在控状态”,而“即刻法”质控图中一次测定结果处于“失控状态”。结论宜采用双质控方法进行狂犬病病毒核衣壳抗原诊断试剂盒实验室内质控。     

中国狂犬病毒疫苗株CTN-1-V三个代次的GP基因序列分析

目的分析三个代次CTN-1-V病毒株糖蛋白(GP)基因部分序列,并与代表性街毒株进行比较。方法利用RTPCR反应,从感染了CTN-1-V病毒的小鼠脑内获得GPcDNA的部分片段,并进行序列测定。结果三个代次的CTN-1-V病毒株GPcDNA序列的690个核苷酸与代表性狂犬病毒GP核苷酸相应序列同源性为83.2%～96.8%,氨基酸序列同源性为90.0%～97.4%。CTN1V株三代之间的核苷酸序列几乎相同。结论CTN1V株在传代过程中GP基因结构基本稳定,与中国流行的代表性街毒株的同源性高于aG株和PV株。     

大鼠血清中抗轮状病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立及验证

目的建立大鼠血清中抗轮状病毒(rotavirus,RV)IgG抗体的间接ELISA检测方法,并进行验证。方法以兔抗RV多抗血清作为包被抗体,RV作为检测抗原,建立抗RV IgG抗体间接ELISA检测方法。棋盘滴定法优化包被抗体浓度(1∶1000~1∶1024000)和血清浓度(1∶20~1∶2560),直接ELISA法优化生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度(1∶1000~1∶128000稀释)。采用优化的间接ELISA法检测39份RV抗体阴性大鼠血清样品,样品A450均值加上3倍标准差作为该检测条件的阴阳性判定界值。同时对该方法的专属性、检测限、耐用性进行验证。分别采用建立的方法及荧光灶形成单位(fluorescent focus-forming unit,FFU)方法检测96份临床前安全性评价试验样品,评价二者的符合率。结果建立的间接ELISA法的最适反应条件为:包被抗体稀释倍数为1∶8000,血清稀释倍数为1∶80,生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度为1∶4000,阴阳性判定界值为0.105。方法检测限为0.031,且具有良好的专属性及耐用性。建立的方法与FFU方法检测结果的符合率达95.8%。结论成功建立了抗RV IgG抗体的间接ELISA检测方法,且方法准确可靠,为临床前安全性评价试验提供了一种简便的血清学诊断方法。     

抗狂犬病毒糖蛋白及核蛋白单抗的研制及应用

狂犬病毒CVS株免疫BALB／c小鼠后，获得6株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，经检测，其中4株分泌抗狂犬病毒核蛋白单抗．2株分泌抗糖蛋白单抗．将这些单抗腹水制成狂犬病毒ELISA夹心法酶标诊断试剂，试验结果表明，对固定每株及街毒有较好的特异性．对正常鼠脑及组织培养物无非特异性反应，可检出毒力低至330LD50的CVS林狂犬病毒，有较好的敏感性。     

狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法的建立

目的建立狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法。方法将9批狂犬病疫苗样品及含有不同病毒量的CTN病毒悬液在Vero细胞上培养21d,丙酮固定细胞后,采用免疫荧光法检测,同时与小鼠法进行比较;并验证细胞培养法的重复性和灵敏度。结果细胞培养免疫荧光法检测的9批狂犬病疫苗样品结果均为阴性,CTN病毒液均为阳性,与小鼠法检测结果一致。细胞培养法的检测灵敏度可达3.3FFU/ml,重复性良好。结论已建立了狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法 ,该法具有良好的灵敏度和重复性,可用于狂犬病疫苗的灭活验证。     

我国流行的4株狂犬病街毒株G基因序列及分子流行病学研究

目的探讨我国流行的狂犬病毒(RV)基因差异,评价现有疫苗的适用性。方法通过RT-PCR并对其产物测序后获得4株RV街毒株的G基因序列以及G与M和L基因的区间序列。利用计算机分析软件比较4株RV与已经发表的毒株的核苷酸和推导的氨基酸序列。结果糖蛋白(GP)完整的编码基因序列长度为1575 bp。GP氨基酸序列同源性明显高于相应的核苷酸序列(除Mokola外),4株街毒与CTN的同源性高于aG株。GP不同区段比较显示,膜外区同源性高于膜内区。G-M区间核苷酸序列长度为5 bp;除广西4外,其余毒株100％同源。GL区间核苷酸序列长度为2,4 bp,越1与肥东同源性为100％。结论4株RV均属于基因I型。广西的毒株之间存在不同的来源。街毒与疫苗株之间基因存在差异。4株RV与SAD-B19进化途径相近,与PV株相差较远。越1与肥东株亲缘关系极近,可能是由同一毒株演化而来。     

武汉地区呼吸道合胞病毒分离株的G蛋白基因遗传特征

目的分析武汉地区人呼吸道合胞病毒(RSV)分离株的G蛋白基因的遗传特征。方法使用不同的特异性引物,对武汉地区2006年分离的9株RSV进行G基因3′末端第2个高变区的序列测定,并进行基因分型和基因亲缘关系分析。结果分离的9株RSV中,33.3%(3/9)为A亚型,属GA2基因型;66.7%(6/9)为B亚型,其中1株属于BA基因型,5株属于GB8基因型。9株RSVG蛋白与原型株核苷酸同源性为84.5%～99.0%,且与原型株相比,在205～230位氨基酸中有5～8个位点氨基酸变异,还存在糖基化位点的改变。结论2006年初在武汉地区存在着由不同RSV株引起的传播链,A、B亚型共循环,B亚型是优势流行亚型;9株RSVG蛋白与原型比较,存在明显的差异。     

CTN株疫苗对中国狂犬病病毒街毒代表株的保护性

目的研究人用狂犬病病毒CTN株疫苗对中国狂犬病病毒街毒代表株的保护性,为评估该疫苗的适用性提供依据。方法用CTN株疫苗免疫昆明小鼠,用3株具有代表性的街毒株CQ92、HN06、J和标准攻击毒株CVS经脑内和肌肉攻击,以未免疫小鼠进行脑内和肌肉攻击为对照,观察CTN株疫苗的保护效果。结果原倍和5倍稀释的疫苗免疫的小鼠经3株街毒肌肉攻击后,均得到100%的保护,与对照组比较,差异均有极显著意义;经3株街毒脑内攻击后,原倍疫苗免疫的小鼠均得到100%的保护,5倍稀释的疫苗免疫的小鼠对3株街毒CQ92、HN06、J的保护率分别为85%、75%和77.8%,与对照组比较,差异均有极显著意义。结论CTN株疫苗总体上能有效预防我国目前狂犬病的流行。     

新分离5株狂犬病病毒街毒株N和G基因的序列分析

目的分析我国新分离的5株狂犬病病毒(RV)街毒株基因序列及分子流行病学状况。方法采用RT-PCR法从疑似狂犬的犬脑组织内获得N和G基因cDNA的全序列并进行测序,将所得结果与已发表的国内外代表性毒株相应基因进行核苷酸和推导氨基酸序列比较。结果5株均含有完整N基因序列,3株含有完整G基因序列。与国内外发表的部分毒株比较,5株街毒N基因的核苷酸同源性在98.1%～99.9%之间,推导氨基酸同源性在99.5%～100%之间。将5株街毒与人用疫苗株3aG、PV株的N基因进行比较,核苷酸同源性在86.2%～86.7%之间,氨基酸同源性在95.1%～95.5%之间;而与人用疫苗株CTN比较,核苷酸同源性在89.4%～89.6%之间,氨基酸同源性在98.2%～98.6%之间。3株街毒G基因的核苷酸同源性在98.5%～99.4%之间,推导氨基酸同源性在99.6%～100%之间。将3株街毒与人用疫苗株aG、PV和兽用疫苗株ERA的G基因进行比较,核苷酸同源性在82.8%～83.1%之间,氨基酸同源性在88.0%～90.1%之间;而与人用疫苗株CTN比较,核苷酸同源性在86.7%～87.1%之间,氨基酸同源性均为92.0%。结论新分离街毒株基因未发生较大变异,与CTN的同源性高于与aG株和PV株。