红色诺卡氏菌高产菌的ARTP诱变选育与发酵条件优化

以红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)FIM-PO8为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)技术进行诱变,经筛选获得遗传较稳定的Nocardia rubra高产菌株FIM-PO8-16,并通过单因素实验和正交实验优化了菌株FIM-PO8-16的发酵工艺。确定最佳发酵培养基组分为：酵母粉2.5%、葡萄糖2.5%、蛋白胨0.5%、糊精1.0%;最佳发酵条件为：种子液菌龄30 h、初始pH值7.2、接种量2.0%、装料量100 mL/500 mL、转速230 r·min^-1、发酵温度32℃。在此条件下,FIM-PO8-16菌体细胞浓度大幅提高,达到8.31%。     

红卡壁骨架化学成分分析与结构表征

通过发酵酶解制备了红卡壁骨架(N-CWS),采用化学鉴别、比色法、高效液相色谱法(HPLC)对其化学成分进行了分析,并通过扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、差示扫描量热法(DSC)、热重-差热分析(TG-DTA)等对其微观结构和热分解性能进行了表征。结果表明,N-CWS主要含有多糖、类脂化合物、氨基酸等成分,其中多糖主要由阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖醛酸等单糖组成;N-CWS粉末易聚集、黏连,单个骨架尺寸为500 nm×300 nm; N-CWS为无定形粉末,其TG曲线只有1个失重台阶,热分解温度在285℃附近,具有较好的热稳定性。     

辐射诱变结合抗自身产物选育替考拉宁高产菌株

采用~(60)Co γ-射线辐射结合抗性筛选技术,对替考拉宁产生菌替考游动放线菌FIM-16的孢子进行诱变处理,以替考拉宁自身抗性作为选择压力,并通过摇瓶发酵对抗性基因突变株进行筛选。结果获得一株摇瓶发酵水平较出发菌株FIM-16提高两倍的高产菌FIM-16-58,且遗传性状相对稳定,菌种传3代发酵水平无明显影响,菌种斜面在4°C稳定保藏两个月;其在1 T发酵罐上发酵,添加0.1%的玉米油可有效抑制泡沫的产生,替考拉宁产量达5.0 g/L以上。     

红色诺卡菌细胞壁骨架胶囊的制备及其生物学活性

目的制备红色诺卡菌细胞壁骨架(N-CWS)胶囊,并检测其生物学活性。方法采用超声波法和冷冻干燥法制备N-CWS胶囊,并通过影响因素试验、加速试验及长期试验考察其稳定性,通过小鼠抑瘤试验检测其生物学活性。结果所制备的N-CWS胶囊各项质量指标均符合相关要求,稳定性良好;口服给药对小鼠移植性肿瘤有明显的抑制作用。结论本实验制备的N-CWS胶囊质量稳定,抗肿瘤活性强,适于工业化生产。