慢性粒细胞白血病Bcr/Abl基因OD域融合蛋白的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化慢性粒细胞白血病(CML)Bcr/Abl基因OD域融合蛋白。方法将TAT、OD和HA基因片段顺次克隆入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒pTAT-OD-HA,经PCR、双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL2(lDE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Westernblot分析后,用镍离子亲和层析柱纯化。结果所构建的重组质粒pTAT-OD-HA经PCR、双酶切及测序鉴定正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为30000,诱导6h蛋白表达量达最高,约为10%;Westernblot分析显示,该蛋白可与鼠抗HA单克隆抗体发生特异性反应;纯化后纯度约为95%。结论已成功原核表达并纯化了TAT-OD-HA融合蛋白,为进一步研究其在CML中的作用奠定了基础。     

超高空心墩翻模施工工艺研究

在山岭地区修建高墩桥梁是较常见的施工方法,但是施工进度较长、施工成本投入较多,文章通过对超高墩施工研究,最大限度地降低了模板施工人员和和机械设备工作量,现场管理简便易行。提高质量。模板拼装简单,易于操作及保证拼装质量。     

新型高压密闭式电缆射孔装置及施工工艺

阐述了研制新型高压密闭射孔装置的目的及意义;高压密闭装置的组成及作用;采用的技术原理;主要技术指标和技术关键以及此施工工艺推广应用情况及效益。本装置由高压防喷管、高压防喷盒、高压注脂泵、高压密闭闸门及转换接头等组成。高压密闭电缆射孔装置可广泛应用于各类带压油气井,使用51枪、60枪、73枪、89枪、102枪等枪型进行电缆射孔及带压打捞井下落物作业;亦可用于分层压裂时带压下桥塞作业。此装置可有效地防止射孔时井喷事故的发生,每年可减少由于井喷事故造成电缆材料损失(40~50)万元。可防止环境污染,节约压井作业费用5万元/井次,对安全和环保具有十分重要的意义。     

鱼雷报警接收器

为了使鱼雷在任何工作环境下的报警均能有效（快速和可靠），最佳办法是采用反鱼雷专用声纳，为此ＤＣＮ公司开发出了一种单独使用的接收器（ＲＥＡＬＴＯ），它连接着一个能够左／右接收、且能够使鱼雷全自动报警的特殊天线。若舰船已装备了传统的声纳，则只在声纳上加一个特殊的鱼雷检测分类模块，不但成本低，而且也能有效解决鱼雷报警问题。因此，ＤＣＮ公司推出了一种增加接收器。与ＲＥＡＬＴＯ相比，它用于同样的信息处理，只     

潜艇和水面舰艇的反鱼雷防御系统(软杀伤)

反鱼雷防御系统的目的是避免被攻击鱼雷击中，常规柴油发电机潜艇易受鱼雷攻击是由于它有限的规避能力，而水面舰艇易受重型鱼雷（ＨＷＴ）的攻击是由于敌方潜艇的“偷袭”，对入射鱼雷的探测经常产生第一报警。     

小井眼复合射孔技术研制与应用

本文介绍了研制小井眼复合射孔技术的目的及意义，采用的技术原理，主要研究内容以及此工艺推广应用前景。     

嵌合泛素连接酶TrCP-CC及其突变体△F-CC重组腺病毒的构建及鉴定

目的构建嵌合泛素连接酶TrCP-CC及其突变体△F-CC的重组腺病毒,并检测其表达。方法采用PCR和重叠PCR法构建真核表达质粒Migr1-TrCP-CC-HA和Migr1-△F-CC-HA,以此为模板,通过PCR将其克隆至穿梭质粒pAd-Track-CMV,构建重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-TrCP-CC和pAdTrack-△F-CC,再与骨架载体pAdeasy-1经同源重组得到重组腺病毒质粒pAd-TrCP-CC和pAd-△F-CC,转染HEK293细胞进行包装扩增,得到重组腺病毒Ad-TrCP-CC和Ad-△F-CC,测定其滴度,并经RT-PCR检测目的基因的转录水平。结果经酶切和测序证实重组腺病毒质粒pAd-TrCP-CC和pAd-△F-CC构建正确,经HEK293细胞包装后显微镜下可观察到绿色荧光,病毒滴度分别为2.5×109和1.0×109pfu/L,经RT-PCR检测目的基因可有效表达。结论已成功构建重组腺病毒Ad-TrCP-CC和Ad-△F-CC,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步研究其靶向融合蛋白Bcr-Abl泛素化和降解的机制奠定了基础。     

稳定表达BCR/ABL-T315I的小鼠BP210-T315I细胞株的建立

目的构建能稳定表达T315I的BCR/ABL的小鼠BP210-T315I细胞株,并观察该细胞株对酪氨酸激酶抑制剂STI571的敏感性。方法采用PCR法将重组逆转录病毒载体MIGR-P210中的abl基因第944位碱基C定点突变为T,再将该位点突变成功的逆转录病毒载体转染到包装细胞内,收集病毒,感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆获得稳定表达T315I的BCR/ABL蛋白的小鼠BP210-T315I细胞。采用RT-PCR、DNA测序和Western blot鉴定abl基因第944位碱基是否发生突变;MTT法检测BP210-T315I细胞对STI571的耐药性。结果 T315I的bcr/abl基因已整合到BaF3细胞基因组中,B210-T315I细胞能稳定表达T315I的bcr/abl基因与蛋白;与BaF3-P210细胞株相比,经STI571处理后,BP210-T315I细胞对STI571明显耐药,其耐药倍数约为100。结论已成功构建稳定表达小鼠T315I的转化细胞株,该细胞株具有对STI571耐药的恶性表型特征。