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目的原核表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuber-culosis,MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白(recombinant ESAT6-CFP10,rEC),并优化表达条件。方法以(GGGGS)3为linker将ESAT6和CFP10两个基因连接,合成rEC全基因,插入至载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-rEC,转化至感受态E. coli BL21(DE3),筛选优势菌株进行诱导表达,并对诱导温度(25、30、37℃)、诱导剂种类及浓度(0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、1. 0 mmol/L IPTG及0. 5、1、5、10、15、20 g/L乳糖)、诱导时间(2、3、4、5、6 h)、诱导起始A600(0. 4、0. 6、0. 8、1. 0)进行优化。菌种经5 L发酵罐发酵培养后,采用亲和层析及离子交换层析纯化rEC融合蛋白,于-20℃分别储存0、2、4、6个月,12. 5%SDS-PAGE分析rEC融合蛋白,并对保存0、6月的样品进行HPLC-SEC分析。结果重组质粒pET-28a-rEC经双酶切及测序鉴定,构建正确。rEC融合蛋白最适诱导条件为:于30℃,以0. 1 mmol/L IPTG诱导4 h。纯化后rEC融合蛋白纯度达95%以上,且可与鼠抗ESAT6单克隆抗体发生特异性结合,于-20℃保存6个月未见蛋白降解及聚体产生。结论原核表达了rEC融合蛋白,并优化了其表达条件,获得的rEC融合蛋白具有较高纯度及稳定性。 相似文献
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矿产资源整合是极具中国特色的矿政管理措施,通过全国范围内两轮相对集中的整合行动,我国矿业秩序得到了较好整顿和规范。为了实现资源优势向经济优势的转化,促进特色优势产业的发展,必须围绕矿产资源的合理开发利用与保护做好文章,需要通过进一步的矿产资源整合来实现矿业经济的有序发展,使整合行动助力于地区经济的健康快速发展。如何推动资源整合,首先应该拓展资源整合的思路,进一步明确目标任务,将整合与产业结构调整、资源节约与利用、生态环境保护及区域经济协调发展等国家宏观政策相统一,要因地制宜,科学有效地设定诸如最低生产规模、综合利用指标、生态环境恢复治理指标等各种整合的约束评价体系标准和政策;也要尊重地质矿规律,进一步规范矿业权管理,尤其是探矿权的管理。通过提升矿政管理的水平,来推进矿产资源的有效整合,从而实现资源优势向经济优势的转化,助力地区优势特色产业的发展。 相似文献
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由于初始地应力场的分布是影响隧道围岩稳定性的重要因素之一,得合理有效地模拟地应力场的分布在隧道工程中的应用显的尤为重要.本文根据地应力实测数据和有限元数学模型,提出了区域构造应变回归分析方法.在此基础上结合工程实例,运用构造应变同归分析和当前应用广泛的边界应力同归分析两种方法模拟了隧道围岩的地应力场的分布,并对两种方法... 相似文献
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研究了由８５％的工业级热法磷酸与精制氧化钙或氢氧化钙直接合成磷酸氢钙的新工艺，确定了该工艺中的最佳生产条件，简述了该产品的应用情况 相似文献
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《动态网页设计》是广东省中等职业技术学校计算机网络专业教学指导方案中规定的核心专业课程之一，笔者在职业学校中担任本门课程的教学工作，针对该课程的教学目标、课程特点和学生特点等具体情况，就如何运用合作学习有效地开展课堂教学活动，本文给出了具体的实例并提出自己的建议。 相似文献
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《动态网页设计》是广东省中等职业技术学校计算机网络专业教学指导方案中规定的核心专业课程之一,笔者在职业学校中担任本门课程的教学工作,针对该课程的教学目标、课程特点和学生特点等具体情况,就如何运用合作学习有效地开展课堂教学活动,本文给出了具体的实例并提出自己的建议。 相似文献
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