PELA-OmpK微球疫苗的部分特征及其对鲫鱼的口服免疫效果

目的研究聚-DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(DL-polylactide-co-polyethylene glycol,PELA)包裹哈维弧菌(Vibrio har-veyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK制备的微球疫苗的部分特性及其对鲫鱼(Carassius auratus gibelio)的口服免疫效果。方法用可生物降解的合成高分子材料PELA,通过乳化溶剂挥发法包裹OmpK,制备微球疫苗,Bradford法测定蛋白浓度,计算蛋白包裹率;通过扫描电镜观察微球粒径大小及其在4℃保存不同时间的形貌。取鲫鱼随机分为3组:微球疫苗组、OmpK蛋白组和空白对照组,前两组采用疫苗或蛋白拌饲投喂方式口服免疫,投喂3 d,间隔7 d,再投喂3 d加强免疫;对照组投喂不含疫苗的饲料。加强免疫4周和8周后,经腹腔注射20 LD50的Vh EcGS020802株攻击,记录各组鱼死亡数,计算相对免疫保护率。结果制备的PELA-OmpK微球疫苗中OmpK蛋白的包裹率达78%。微球粒径小于12μm,且90%微球的粒径小于5μm。4℃保存10 d微球表面光滑、圆整;保存30 d PELA微球降解,粒径较大的微球表面出现空洞;保存60 d可见大量碎片,微球表面毛糙松散,出现多个空洞。微球疫苗加强免疫鲫鱼4周和8周后,对活菌攻击的相对免疫保护率分别为70%和48%,而口服OmpK蛋白组和空白对照组鱼全部死亡。结论用PELA包裹裸疫苗制备成微球疫苗,对抗原具有一定的保护作用,PELA用作鱼类口服疫苗的投递载体是可行的。     

大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗生产工艺条件的优化

目的优化大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗的生产工艺条件。方法通过对大菱鲆鳗弧菌VAM003株培养基(TSB和LB)、培养基盐度(1. 5%、2. 0%、2. 5%、3. 0%、3. 5%NaCl)、接种量(5%、10%、15%)、发酵时间(6～12 h)进行筛选,采用最适发酵条件制备大菱鲆鳗弧菌VAM003株发酵菌液,分别加入不同终浓度的甲醛(0. 1%、0. 2%、0. 3%、0. 4%)灭活24、48、72 h,确定最适灭活条件。采用最适生产工艺制备2批大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗,并进行安全性及效力试验。结果大菱鲆鳗弧菌VAM003株最适发酵培养条件为:用含2. 5%NaCl的TSB培养基,在接种量10%条件下发酵培养10～12 h,活菌量达5×109 CFU/m L以上;最适灭活条件为:甲醛终浓度0. 2%灭活24 h。大菱鲆注射灭活疫苗后,全部健活,未出现临床症状,摄食、游姿及体色均正常,注射部位无红肿,内脏器官无病变;疫苗的免疫保护率达90%以上。结论成功优化了大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗规模化生产工艺条件,制备的灭活疫苗具有良好的安全性及效力,可用于大菱鲆鳗弧菌病的预防。     

嗜水气单胞菌J-1株灭活疫苗生产工艺的改进

目的 改进嗜水气单胞菌J-1株灭活疫苗的生产工艺,提高培养效率.方法 采用改良培养基和产毒素培养基,利用机械式通风搅拌培养J-1菌株.确定发酵培养时间,并比较两种培养基的培养效果;用摇瓶灭活和罐灭活J-1菌株培养液,比较不同浓度甲醛的灭活效果.结果 用机械搅拌发酵罐培养J-1菌株,菌体生长12～14 h达峰值,产毒素培...     

弧菌福尔马林灭活条件的初步研究

目的 初步研究弧菌福尔马林灭活条件,为弧菌灭活疫苗的生产工艺提供参数。方法对弧菌培养菌液添加不同浓度的福尔马林,于不同温度下测定灭活时间;采用摇瓶和发酵罐培养弧菌,在28℃比较灭活效果,并检测弧菌灭活疫苗原液的安全性。结果福尔马林对弧菌的最低抑菌浓度为0.025%,不同浓度的福尔马林及不同温度所需的灭活时间不同,福尔马林浓度越大,灭活时间越短,加热能缩短灭活时间。摇瓶和罐灭活效果检测显示,在28℃,0.3%的福尔马林24 h可完全灭活,弧菌二联灭活疫苗原液的安全性符合要求。结论 0.3%福尔马林在28℃灭活24 h,是比较理想的弧菌灭活方法。     

壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗的制备及其对斜带石斑鱼的口服免疫效果

目的制备包裹哈维弧菌(Vibrio harveyi,Vh)重组外膜蛋白Omp K的壳聚糖-海藻酸钠复合微囊疫苗,并检测其对斜带石斑鱼的口服免疫效果。方法采用乳化-复乳化法将壳聚糖、海藻酸钠包裹哈维弧菌重组外膜蛋白Omp K,制备微囊疫苗,测定其粒径、包裹率及载抗原量;经口灌服免疫斜带石斑鱼,2周后进行加强免疫,设Omp K蛋白组和空白对照组,ELISA法检测免疫后斜带石斑鱼血清及后肠黏膜上清抗体水平;于免疫后30 d,经斜带石斑鱼腹腔注射1.0×107 CFU/ml的哈维弧菌,计算各组相对保护率(relative percent survival,RPS)。结果微囊为球形或类球形,粒径5.0~20.0μm,平均粒径10.6μm;微囊中蛋白平均包裹率为71.26%,平均载抗原量为1.67%。微囊疫苗组血清抗体效价峰值为29,明显高于Omp K蛋白组(P<0.01);微囊疫苗组后肠黏膜上清的吸光值(A450-A630)明显高于Omp K蛋白组和空白对照组(P<0.01)。微囊疫苗组的RPS达62.5%,高于Omp K蛋白组(P<0.01)。结论制备的壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗口服石斑鱼后,具有较好的免疫效果,作为鱼类口服疫苗的投递载体是可行的。     

维氏气单胞菌CA07株灭活疫苗生产工艺的优化

目的 优化维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,AV)CA07株灭活疫苗的生产工艺。方法 通过对AV CA07株菌种培养时间(2～16 h)、发酵培养基(优化发酵培养基、LB培养基、NB培养基)、发酵条件[接种量(1%、5%、10%、15%)、通气量(2、4、6、8 L/min)、发酵时间(6、8、10、12 h)]的优化，确定AV CA07株菌液的发酵工艺。通过对灭活剂甲醛溶液的终浓度(0.10%、0.20%、0.30%、0.40%)、灭活温度(28和37℃)、灭活时间(24、48、72 h)的比较，确定最佳灭活工艺。建立AV CA07株灭活疫苗500 L发酵罐规模化生产工艺，并对制备的疫苗进行安全性及免疫原性试验。结果AV CA07株发酵工艺的最佳接种量为5%，通气量为4 L/min，培养时间为10～12 h；最佳灭活条件为：用终浓度0.30%的甲醛溶液于37℃灭活24 h。500 L发酵罐制备的AV CA07株菌液活菌数达8×10⁹CFU/mL以上，灭活后经腹部免疫鲫鱼，鲫鱼全部存活；攻毒后，相对免疫保护率达90%以上。结论 采用优化生产工艺制备...