三种呈味肽串联基因的构建和表达

通过对呈味肽GD、AD、VD结构的分析,引入甲酸和胰蛋白酶的专一性位点,设计了呈味肽的串联单体.根据大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成寡核苷酸片段,利用拼接法合成此三种肽的8拷贝片段,将其克隆至表达载体pET-30a并转化到宿主菌BL21 (DE3)中.筛选的阳性克隆经测序表明,本研究已成功构建了重组呈味肽工程菌BL21-pET30-8GD、BL21-pET30-8AD、BL21-pET30-8VD.IPTG诱导的菌体总蛋白和破碎液上清的纯化物经Tricine-SDS-PAGE电泳检测,证明目的基因得以成功表达.     

重组降血压肽发酵培养基及发酵条件的优化实验研究

以纯化的融合蛋白包涵体表达量为考核指标,对重组降血压肽发酵培养基的组成和发酵条件进行了优化实验研究。以富含疏水性氨基酸的麦胚水解物为基础培养基,通过正交实验,优化得到大肠杆菌BL21-MF3A3制备重组降血压肽的麦胚培养基配方为:酵母粉0.5%、麦胚酶解物C2.0%、葡萄糖0.5%和NaCl0.5%。对发酵过程中的诱导条件进行正交优化实验,得到最佳的诱导条件为诱导温度32℃、诱导起始OD6001.4和诱导时间10h,在此条件下包涵体表达量可达到535mg·L-1。