烟草18S rDNA染色体原位杂交技术优化研究

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）在细胞遗传学中有较多应用,其中重复序列常被作为探针来研究物种进化、分类。但现常用的探针序列均较长（200 bp-500 bp）,杂交耗时较多。本研究以烟草（Nictiana tabacum）为材料,克隆并标记18S rDNA保守序列（254 bp）,以其为探针对烟草染色体进行FISH,经18 h杂交获得了清晰的信号。在此基础上,利用荧光素直接标记引物序列（寡聚核苷酸）,经较短时间（2 h）的杂交,也获得了清晰的信号。以寡聚核苷酸为探针对云烟87四倍体、N.tabacum-N.plumbaginifolia五倍体、烟草六倍体、云烟87八倍体以及N.plumbaginifolia的染色体进行杂交,均获得了良好效果。且杂交液可简化配制,洗脱过程也可简化。18S rDNA寡聚核苷酸探针与5S rDNA寡聚核苷酸探针结合,实现了N.plumbaginifolia的18S rDNA和5S rDNA双色FISH。所以,该寡聚核苷酸序列可以应用于烟草属植物18S rDNA（45S rDNA）位点的分析,且较大程度缩短了操作时间并简化了操作过程。      

云烟 87 八倍体植株的诱导及其主要生殖特征

通过不同浓度秋水仙素溶液浸泡"云烟 87"四倍体无菌苗茎尖 72 h,经组织培养,成功获得八倍体植株,其中以 0.4%浓度秋水仙素处理检出率最高,为 28.57%。与"云烟 87"四倍体植株相比,八倍体植株花器官明显较大,叶片较厚、较小,节间较短。八倍体植株花粉量小,花粉大小不均一,可见超大花粉,花粉萌发率低,仅为 6.45%。八倍体自交不能结实,但与四倍体烟草品种杂交均可获得大量有活力的种子,发芽率均大于 65%,且与同"云烟 87"四倍体杂交不能获得种子的野生烟草Nicotiana plumbaginifolia杂交也可获得有活力的种子。可见,通过秋水仙素浸泡结合组织培养获得烟草八倍体是可行的。      

不同倍性烟草杂交获得六倍体烟草植株

以本实验室自行创制的云烟87八倍体（2n=8x=96）为母本,L-8四倍体为父本进行杂交,成功获得烟草六倍体（2n=6x=72）植株。经观察统计其花器官特征,花粉特征,并通过体外萌发及杂交试验对其育性进行初步研究。结果显示:烟草六倍体花蕾和花药明显大于云烟87四倍体×L-8四倍体杂交组合四倍体（简称四倍体杂种）后代的花蕾和花药,但花粉量较少;其花粉体外萌发率仅9.78%,明显低于四倍体杂种;六倍体花粉在六倍体及云烟87四倍体柱头上只极少量萌发并穿过花柱;以六倍体为父本,与云烟87四倍体烟草品种杂交以及六倍体自交,不能坐果;而以六倍体为母本、云烟87四倍体为父本可得到一定量种子,其单果种子数与杂种四倍体作母本、云烟87四倍体为父本时差异不大,但发芽率只有21.2%。这表明本研究中的六倍体植株作父本不育,而作母本具有一定的育性,后续研究利用中可将其用作母本。      

封堵件在重卡车架电泳加工中的应用

介绍了重卡车架电泳过程出现的“螺纹进漆”和“管梁周围漆膜气泡”问题,分析了这两类问题的产生原因,介绍了两类问题相应的解决措施,总结了工艺螺塞和封堵片的选型方法。为工艺人员更好地掌握涂装细节提供了参考。     

以子房为材料制备烟草染色体标本的方法

为使烟草染色体标本制备过程中取材更方便,本研究以异源五倍体烟草（2n=5x=58）为材料,观察了不同大小子房、不同预处理方法对烟草染色体制片效果的影响。首先,子房大小按花冠与花萼长度比例分为6类;其次,预处理方法分为2类,即：（1）室温下于0.002 mol/L的8-羟基喹啉中预处理2、4和6 h;（2）7℃下于0.002 mol/L的8-羟基喹啉中预处理12、24和36 h。结果显示,当花冠长度小于或等于花萼长度的1/2时,子房中分裂期细胞的比例最大,为97.00±17.82个/1000个。该时期子房于7℃经24 h预处理后,染色体数目与形态清晰可辨。利用上述方法制作云烟87（2n=4x=48）和N.plumbaginifolia（2n=2x=20）的染色体标本,均获得较好的结果。此外,将上述方法制作的五倍体烟草染色体经5S rDNA-FISH,获得了清晰可辨的5个不同信号,与预期一致。可见,幼嫩子房可用于烟草染色体标本的制作,且用改良的预处理方法制备的染色体标本可用于染色体计数和核型分析,也可用于原位杂交分析。