邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导隐睾对SD幼鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响

目的探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[D(i2-ethylhexy1)phthalate,DEHP]作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中生殖细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只。玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组自妊娠第12.5～19.5天分别每日灌胃玉米油(2 ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药。取各组出生后第20天的雄性幼鼠睾丸组织,采用Q-PCR法检测睾丸组织中Bax和Bcl-2基因的水平,流式细胞术检测睾丸生殖细胞的凋亡情况。结果 DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸组织中Bax基因mRNA的水平显著高于两对照组(P<0.000 1),Bcl-2基因mRNA的水平显著低于两对照组(P<0.01);DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸生殖细胞凋亡百分率显著高于两对照组(P<0.000 1)。结论孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,且隐睾鼠睾丸生殖细胞凋亡率增加,隐睾子代睾丸组织中凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有改变,推测其改变可能参与了生殖细胞的凋亡过程,并可能与隐睾继发的远期不育有关。     

c-Jun氨基末端激酶在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达

目的研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di(-2-ethyl-hexyl)phthalate,DEHP]诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达变化,探讨尿道下裂发生的机制。方法将孕12 d(gestation day,GD12)的SD孕鼠随机分为2组:实验组[将DEHP溶于1.5 ml大豆油中灌胃大鼠,750 mg/(kg.d)]和对照组(以1.5 ml大豆油灌胃大鼠),每组20只,自GD12～GD19连续每天定时给药1次。各组分别取10只孕鼠正常分娩,雄性仔鼠出生后30 d,计数每窝产雄性活仔数,称量体重,并测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD),逐个检查雄鼠的阴茎弯曲度和尿道开口部位,判断有无尿道下裂;其余孕鼠在怀孕第20天行剖宫产取出胎鼠,采用实时定量PCR(qPCR)和免疫组化法分别检测雄性胎鼠阴茎组织中JNK1和JNK2 mRNA和蛋白的表达水平。结果雄性仔鼠出生后30 d,实验组与对照组比较,每窝产雄性活仔数、雄性仔鼠的体重及AGD均有明显减少或缩短(P均<0.001);实验组尿道下裂发生率约为30.6%。与对照组比较,实验组胎鼠阴茎组织中JNK1和JNK2mRNA的水平明显增加(P<0.05),磷酸化JNK1和JNK2蛋白的表达水平有增加的趋势。结论 DEHP诱导的先天性尿道下裂可能与胎鼠阴茎组织中JNK通路异常表达有关。     

Notch1在隐睾SD幼鼠睾丸组织中的表达及其意义

目的探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)已酯(Di-2-ethylhexy1 phthalate,DEHP)作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中Notch1的表达及其在隐睾所致不育症中可能发挥的作用。方法将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分为正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只。玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组SD孕鼠自妊娠第12.5～19.5天,分别每日灌胃玉米油(2 ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药。取各组出生后第20天的雄性幼鼠,镜下观察睾丸位置,并统计隐睾发生情况。采用RT-PCR及Western blot法检测各组雄性幼鼠睾丸组织中Notch1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果与正常对照组和玉米油对照组相比,DEHP诱导隐睾组雄性幼鼠的隐睾发生率明显上升(P<0.05);DEHP诱导隐睾组雄性幼鼠睾丸组织中Notch1基因mRNA和蛋白表达水平均明显低于正常对照组和玉米油对照组(P<0.05)。结论孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,隐睾子代睾丸组织中Notch1表达有改变,并可能与隐睾导致的不育有关。     

分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定野生菌中6种鹅膏毒肽和鬼笔毒肽毒素

目的 建立分散固相萃取(dispersive solid-phase extraction, DSPE)前处理方法和超高效液相色谱—串联质谱法（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS）快速测定野生菌中6种鹅膏毒肽类和鬼笔毒肽类毒素的含量。方法干燥后的样品经酸化甲醇超声提取后,采用石墨化碳黑(graphitized carbon black, GBC)、C18和N-丙基乙二胺(primary secondary amine, PSA)吸附净化,UPLC-MS/MS检测。结果6种毒肽在20~1000μg/kg范围内具有良好的线性关系,相关系数大于0.998。方法检出限为20μg/kg,定量限为50μg/kg。在加标水平为50、250、500μg/kg时,方法的平均回收率为78.9%~115.5%,相对标准偏差为1.6%~6.8%。结论该方法准确可靠,可操作性强,适用于野生菌中6种毒肽的检测。     

固相萃取/超高效液相色谱——串联质谱法测定香辛料中的去甲乌药碱和曲托喹酚

针对香辛料中的去甲乌药碱、曲托喹酚,建立了一种基于固相萃取前处理技术结合超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的检测方法。该方法以去甲乌药碱-D4和曲托喹酚-D9为内标,样品采用0.5%甲酸-甲醇提取,经MCX固相萃取柱净化后,将待测液引入UPLC-MS/MS进行分析,在ACQUITY HSS T3色谱柱上洗脱,多反应监测模式(MRM)下定量分析。结果表明,在2.0～100 ng/mL浓度范围内去甲乌药碱和曲托喹酚具有较好的线性关系(y=1.83952x+0.096246,r=0.999948;y=1.38263x–0.177529,r=0.999846),方法检出限为5.0μg/kg,定量限为10.0μg/kg,化合物在不同基质的3个加标水平(10.0、50.0、200μg/kg)下的回收率为84.6%～108.6%,精密度为1.2%～3.5%(n=6)。采用所建立的方法对市售的30种香辛调味料中的去甲乌药碱和曲托喹酚进行检测,在陈皮、荜拨、毛桃、黑胡椒、香叶、桂枝、肉蔻、桂皮、花椒、白胡椒中检出去甲乌药碱,曲托喹酚均未检出。综上,该方法准确、灵敏、稳定,可用于香辛料中去甲...