枯草芽孢杆菌纤维素酶基因整合载体的构建

目的:以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主,构建纤维素酶基因整合表达载体,获得能够表达纤维素酶并且降解纤维素的工程菌。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从B.subtilis LN基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段,以质粒pGEM-T为载体,将同源片段M1、M2、启动子P43和葡萄糖苷酶基因CelKg连接在一起构建整合载体pGEM-Kmpgmt,并采用双交换同源重组的方式将其转化进入B.subtilis LN基因组中。结果:通过PCR和双酶切验证整合载体构建完成,并成功整合到野生型B.subtilis LN中,获得重组菌B.subtilis Kpg。刚果红染色结果显示重组菌对羧甲基纤维素钠有降解作用。改良培养基37℃条件下摇瓶培养,重组菌B.subtilis Kpg生长至18 h时上清液中纤维素酶活力比野生型B.subtilis LN提高了115%。     

黄曲霉毒素分解酶基因克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

通过GenBank公布的黄曲霉毒素分解酶基因序列,合成ADTZ基因引物。从发霉的玉米样品中提取混合菌液,经菌液PCR扩增,筛选ADTZ基因片段,构建表达载体,将目的基因转化到大肠杆菌中,并进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测表达产物大小和浓度。通过酶解试验检测表达产物对AFB1的降解能力。结果成功从发霉玉米混菌悬液中扩增到ADTZ基因,该基因序列全长2 088 bp,与已报道的ADTZ基因相似度达到99%。该基因可在大肠杆菌中进行融合表达,表达产物蛋白大小为118.5 kDa。重组大肠杆菌培养后获得的粗酶液可降解发霉玉米中的AFB1,降解率达到77.69%。     

生物方法降解黄曲霉毒素的研究

黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉等真菌代谢过程中产生的次级代谢产物,是一种剧毒物质,能够导致机体病变、基因突变和癌变。广泛存在于粮食、食品以及饲料中,对人体健康和动物生产造成严重的不良影响,给粮食储存和畜牧业发展造成巨大的经济损失。生物方法降解黄曲霉毒素是一种有效、安全和环保的黄曲霉毒素解毒方法,论述了生物方法降解黄曲霉毒素,并对生物方法降解黄曲霉毒素应用前景进行展望。