李果实褐腐病病原菌产生细胞壁降解酶条件优化及其致病机理

研究李果实褐腐病病原菌产生细胞壁降解酶的种类及其产酶最佳条件,并探讨其导致果实发病的作用机制。以Monilinia fructicola为研究菌株,通过单因素试验和正交试验优化M.fructicola产生细胞壁降解酶条件;通过损伤接种粗酶液,研究其对李果实的致病作用。结果表明:M.fructicola产细胞壁降解酶的最佳条件为:培养时间6 d、培养基pH 6.0、碳源为3.5%蔗糖、氮源为2.5%硝酸钾;粗酶液处理能够导致李果实发生褐腐病,同时引起果实多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(pectin methylgalacturonase,PMG)活力的上升,使果实原果胶物质转化为可溶性果胶,同时造成其纤维素含量下降,加速果实的软化腐烂进程。     

橄榄假丝酵母控制苹果果实青霉病的效果及机制

通过橄榄假丝酵母与扩展青霉同孔和异孔接种实验、平板对峙实验以及酵母挥发性物质抑菌实验,结合苹 果组织伤口处酵母生长情况及伤口周围组织抗病相关酶活力的变化,阐明橄榄假丝酵母对苹果采后青霉的控制效果 及其可能存在的抑菌机理。结果表明：橄榄假丝酵母处理果实的发病率和病斑直径显著低于对照组（无菌水处理） 果实（P＜0.05）;橄榄假丝酵母不能产生抑菌的次生代谢产物,其挥发性物质对青霉菌的生长无显著抑制作用 （P＞0.05）;橄榄假丝酵母具有较强的繁殖生长和定殖能力,能在苹果果皮定殖、扩增,从而抑制果实接种发病 率和病斑直径的增加;同时,橄榄假丝酵母还能显著诱导果实过氧化物酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶活力增加 （P＜0.05）。综上所述,橄榄假丝酵母抑制苹果扩展青霉发病的机制包括诱导果实抗病性以及与病原菌的营养和 空间竞争。     

机械损伤对脐橙果皮组织结构的影响

由于机械损伤可以引起果皮油胞的破损和后续的油胞病症状,其被认为是脐橙果皮油胞病发生的主要原因;然而机械损伤也能促进其他果皮生理病害的发生。受机械损伤后,果皮的生理病害症状更加复杂,不能简单地归结于油胞病的发生。为了更好地阐明机械损伤后果皮生理病害的发生和发病进程,利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察了机械损伤后‘奉节’脐橙果皮生理病害发生进程中的超微结构变化,同时测定果皮果胶、纤维素、木质素等结构物质含量和脂氧合酶活力、超氧阴离子自由基产生速率的变化。结果表明：机械损伤后,脐橙果皮细胞膜完整性受到破坏,黄皮层油胞细胞出现明显降解,进而导致油胞的破裂、橘油的释放以及白皮层和黄皮层的降解。机械损伤处理后,果实果皮脂氧合酶活力和超氧阴离子自由基产生速率在贮藏前期快速增加,果皮原果胶含量急剧下降,贮藏7～11 d,机械损伤果实果皮可溶性果胶含量显著高于对照组果皮（P＜0.05）。本实验结果可为脐橙果皮受到机械损伤后超微观结构变化的原因提供参考。     

黄腐酸处理对塔罗科血橙成熟过程中花色苷和糖酸积累的影响

为探究血橙增糖促色的方法,该研究以塔罗科血橙为试材,于转色期后(花后230 d)叶面喷施1 g/L黄腐酸(fulvic acid, FA),运用高效液相色谱和实时荧光定量PCR等技术,测定塔罗科血橙成熟过程中花色苷和糖酸含量的变化及相关代谢基因表达丰度。结果表明,叶面喷施FA可促进血橙果肉着色,显著增加血橙花色苷以及总糖、果糖、葡萄糖、蔗糖的含量。花后324 d, FA组花色苷含量为48.92 mg/L,比对照组提高了153.7%。FA处理后血橙花色苷代谢基因4CL、CHS、DFR、ANS、UFGT、GST表达量显著上调。花后324 d, FA组总糖、果糖、葡萄糖、蔗糖含量分别为75.33、20.87、20.22、33.84 mg/g,比对照组分别提高了10.2%、15.1%、14.5%、6.7%。FA处理后血橙糖代谢基因AI表达量显著上调。而FA处理对血橙成熟过程中有机酸含量的影响不显著。FA处理后血橙酸代谢基因CS、AC、IDH调控柠檬酸积累的作用不大。综合分析认为,转色期后叶面喷施FA激活了4CL、CHS、DFR、ANS、UFGT、GST、AI表达,促进血橙增糖着色,改善血橙品质...     

蜜橘酸腐病病原菌的分离鉴定以及不同抑菌剂处理对其控制效果

为确定蜜橘果实酸腐病的致病菌及膜醭毕赤酵母、水杨酸和壳寡糖对蜜橘果实采后酸腐病的控制效果,从自然发病的蜜橘果实上分离出一株致病真菌,通过形态学特征、rDNA-ITS分析以及致病性检测,发现该真菌为蜜橘白地霉(Geotrichum candidum)。离体实验发现2.5 mmol/L水杨酸、质量分数1.5%壳寡糖处理能够抑制白地霉孢子萌发和菌丝的生长,膜醭毕赤酵母产生的挥发性物质能够抑制白地霉菌丝的生长。果实上的实验结果表明,1×10~8 CFU/m L膜醭毕赤酵母、2.5 mmol/L水杨酸、1.5%壳寡糖同孔接种和异孔接种处理均能够有效抑制蜜橘果实酸腐病的发病率和病斑直径的上升,其中同孔处理膜醭毕赤酵母效果最好,异孔处理水杨酸效果最好。     

苯并噻二唑处理对柑橘果实采后病害控制效果及机制分析

以‘丰脐’柑橘果实为试材,研究了不同浓度苯并噻二唑（benzothiadiazole,BTH）和青霉菌 （Penicillium italicum）、绿霉菌（Penicillium digitatum）、炭疽菌（Colletotrichum gloeosporides）同孔、异孔接 种对柑橘果实青霉病、绿霉病、炭疽病的控制效果,筛选出针对这3 种病害控制效果最适宜的BTH浓度,在此浓 度下考察打孔和浸泡处理对果实果皮内源水杨酸含量和抗病性相关酶活力的影响。实验结果表明：0.25、0.50、 1.00 mmol/L 3 种浓度的BTH与P. italicum、P. digitatum、C. gloeosporioides同孔或异孔接种均可以降低果实青霉病、 绿霉病、炭疽病的病斑直径,其中,0.50 mmol/L的BTH效果最好;在病害发病率方面,3 种浓度的BTH处理均在果 实发病初期有效果,后期效果不显著,相比之下,0.50 mmol/L的BTH效果较好。最适浓度下,通过对果实果皮内源 水杨酸含量和抗病性相关酶活力的研究发现,BTH损伤接种能增加果皮内源水杨酸的含量,BTH浸泡处理对果皮内源 游离态水杨酸含量无显著影响,但能促进果皮内源结合态水杨酸含量的积累;BTH损伤接种和浸泡处理均能增加柑橘 果皮β-1,3葡聚糖酶、几丁质酶、苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶和多酚氧化酶的活力。由此推测,BTH处理诱导柑橘果 实提高了其采后抗病性。     

基于广泛靶向代谢组学的血橙枯水时柠檬酸降解途径研究

枯水是影响柑橘果实品质的主要生理性病害,果实发病后风味寡淡,不堪食用。枯水主要类型为汁胞粒化型枯水和汁胞萎缩型枯水,后者研究较少。以汁胞萎缩型枯水的塔罗科血橙为实验材料,运用广泛靶向代谢组学分析汁胞萎缩型枯水的初生代谢物及代谢途径变化,并进一步结合氨基酸含量、关键酶活性及基因表达分析解析枯水时柠檬酸降解机制。研究结果表明:有193种初生代谢物的含量在汁胞枯水时显著变化,其中柠檬酸含量显著下降了53.1%,乙酰辅酶A途径代谢产物丝氨酸、亚油酸及其他脂类物质的含量显著升高;脂代谢基因在枯水时上调表达;编码ATP-柠檬酸裂解酶的基因CsACLs的表达没有变化;谷氨酰胺合成酶活性在枯水时增加了75.3%;γ-氨基丁酸含量没有变化,谷氨酰胺脱羧酶活性没有变化,编码谷氨酰胺脱羧酶的基因CsGADs在枯水时下调表达。研究表明,乙酰辅酶A合成途径是血橙汁胞萎缩型枯水时柠檬酸快速降解的主要机制,结果旨在为明确柑橘枯水机制提供一定的参考。     

不同保鲜剂对柑橘果实贮藏品质的影响

以纽荷尔脐橙、奉节72-1脐橙、夏橙3种柑橘果实为研究对象,分别在复合有2,4-dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D)的壳寡糖、"活力鲜"保鲜剂、膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)以及低剂量多菌灵+膜醭毕赤酵母4种处理液中浸泡后,晾干套袋,室温、低温(5℃)下贮藏,观察发病和品质变化情况。结果表明,与对照相比,各保鲜剂处理对柑橘果实都有不同程度的病害控制效果,其中"活力鲜"保鲜剂复合2,4-D处理效果最佳;多菌灵复合膜醭毕赤酵母和2,4-D处理的保鲜效果优于膜醭毕赤酵母复合2,4-D处理;各保鲜剂处理对果实可溶性固形物(Total Soluble Solid,TSS)、可滴定酸(Titratable Acid,TA)含量无明显影响;低温可显著延缓果实TSS含量、TA含量和重量的降低。     

1-MCP和戊唑醇处理对青脆李果实贮藏期病害和品质的影响

研究5 μL/L 1-甲基环丙烯（1-methylcyclopropene,1-MCP）与两种质量浓度（13.5、27.0 mg/L）戊唑醇单独或者结合处理对采后青脆李果实贮藏期褐腐病的控制效果以及对色泽和硬度的影响,以探讨1-MCP结合戊唑醇处理应用于青脆李果实采后保鲜的可能性。结果表明,20、0 ℃贮藏条件下两种质量浓度戊唑醇单独处理、1-MCP与两种质量浓度戊唑醇结合处理能够有效控制青脆李果实褐腐病损伤接种发病和自然发病;1-MCP单独处理不能控制常温条件下损伤接种李果实的褐腐病,但能够控制低温条件下损伤接种李果实褐腐病发生以及常温、低温条件下果实的自然发病;1-MCP与27.0 mg/L戊唑醇结合处理控制病害的效果最好。同时,1-MCP单独处理、1-MCP与两种质量浓度戊唑醇结合处理能够有效抑制果实的转黄和软化进程,戊唑醇单独处理不能延缓李果实的转黄和软化进程。贮藏过程中,13.5 mg/L戊唑醇单独处理、1-MCP与13.5 mg/L和27.0 mg/L戊唑醇结合处理组李果实中戊唑醇的残留量均低于国标规定的最大残留限量。     

CaCl2增强橄榄假丝酵母对苹果果实采后青霉病的生防效力

采用同孔接种的方法研究橄榄假丝酵母（Candida oleophila）结合CaCl2处理对采后苹果青霉病的控制效果及相关机理。结果表明：采用1×107 CFU/mL橄榄假丝酵母结合10 g/L CaCl2处理苹果果实,对其采后青霉病有显著的控制效果,且效果明显优于橄榄假丝酵母单独处理;在25 ℃条件下培养,橄榄假丝酵母能在果实伤口处迅速定植生长,并持续保持较高水平,10 g/L CaCl2对橄榄假丝酵母生长状态有明显促进作用;同时,橄榄假丝酵母复合CaCl2处理能显著诱导苹果果实几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活力的提高,促进相关代谢产物木质素、总酚、类黄酮的积累。