云南不同产地醇化雪茄烟叶微生物群落差异研究

为探讨云南不同产地醇化雪茄烟叶的微生物群落结构与国外优质雪茄烟叶的差异,以6个不同产地的7组雪茄烟叶为试验材料,采用高通量DNA测序技术,对烟叶样品中的细菌、真菌群落进行了微生物组学分析。结果显示,样本中细菌群落丰富度高于真菌。根据主要菌群丰度的相似性特征,能够对不同产地的样本进行聚类。在细菌方面,云南德宏、玉溪的烟叶与巴西烟叶群落结构最接近,其共有且相对丰度较高的主要菌属为Staphylococcus、Atopostipes、Corynebacterium、Pseudomonas及Brevibacterium。在真菌方面,同样是玉溪、德宏与巴西、多米尼加的样本最接近,它们之间共有且丰度较高的类群是Aspergillaceae科的1个属、Alternaria属、Aspergillus属、Wallemia属以及Cladosporium属等。这些微生物可能对降解烟草中的大分子有机物起到积极作用。     

荧光假单胞菌YG-1对烟草根黑腐病菌的体外拮抗

为丰富烟草根黑腐病菌高效拮抗菌资源,从玉溪烟草种植区根际土壤中分离烟草根黑腐病高效拮抗菌,结合生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定高效拮抗菌,测定菌株发酵液挥发性物质及发酵液粗提物对根黑腐病菌的拮抗活性。结果表明,筛选得到的12株拮抗菌中YG-1表现出最强的拮抗活性,经生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluroescens）。菌株YG-1发酵液挥发性物质可有效抑制烟草根黑腐病菌的生长,使菌丝扭曲畸形,并且降低产孢量,经GC-TOF-MS测定,YG-1发酵液含有酸、醛、酯以及一些含硫化合物,其中酸类物质和含硫化合物抑菌效果强。菌株YG-1发酵液粗提物能破坏烟草根黑腐病菌孢子质膜,当粗提物质浓度为0.25 mg/mL时,孢子失膜率达55.42%,同时检测到有明显的离子和核酸渗漏。拮抗菌YG-1具备开发为生防菌剂的潜力。     

玉溪雪茄烟发酵霉变病原菌鉴定及生防菌筛选

为明确云南玉溪雪茄烟发酵过程中的霉变病原菌，采用组织分离法从霉变烟叶上分离病原菌，并依据柯赫氏法则，结合形态学和ITS基因鉴定病原物种类，以病原菌为指示菌筛选生防菌，经室内发酵验证防霉变效果及对香气成分的影响。柯赫氏试验结果表明，原分离病菌XJ-a与显症烟叶再分离病菌XJ-b在形态、显微、病状上高度相似，两株病原菌ITS序列与多株Aspergillus flavus菌聚为一支，序列一致性大于99%，综合形态学和分子生物学特征，确定雪茄烟叶发酵霉变病原菌为黄曲霉（A. flavus）。筛选获得3株抑菌活性较强的生防菌，其中菌株CC-3对黄曲霉的抑制带宽度达9.04 mm，鉴定为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。在发酵中添加CC-3可显著降低烟叶霉变率，在发酵15 d和30d霉变率分别下降64.44%和52.66%，并且香气物质总量提高28.96%。本研究确定黄曲霉是玉溪雪茄烟发酵的主要致霉菌，添加生防菌CC-3进行发酵可降低黄曲霉的侵染同时提高香气成分含量。