鹿胎肽对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

本实验从鹿胎中提取鹿胎肽（DFP）,通过体外实验研究其对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。采用噻唑蓝（MTT）实验检测超滤组分各肽段的增殖活性,筛选增殖活性高的组分。选用中性红吞噬实验、酶联免疫吸附检测法测定DFP对RAW264.7细胞吞噬指数、一氧化氮（NO）浓度及细胞因子如白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6和肿瘤坏死因子子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌能力,同时还研究了DFP对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于1 kDa的DFP-5对巨噬细胞RAW264.7作用后,可显著（P<0.05）提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且在DFP-5质量浓度为25 μg/mL时效果最好。细胞周期结果表明,DFP-5能够促进RAW264.7细胞的生长,且主要作用在G0/G1期。以上结果表明,鹿胎肽具有增强免疫能力的潜在作用。     

酶解前后鹿筋体外抗炎活性与其氨基酸组成的相关性

目的:分析酶解前后鹿筋对TNF-α诱导的MH7A细胞抗炎作用的影响。方法:采用MTT法检测鹿筋天然蛋白（DSNP）和鹿筋酶解蛋白（DSEP）不同分子量的超滤组分的增殖抑制活性,筛选增殖抑制活性最佳的组分,测定活性组分对MH7A细胞分泌炎症因子（NO、IL-6）的影响,分析鹿筋酶解前后活性组分中氨基酸组成及含量。采用多元统计分析找出酶解前后鹿筋的差异性氨基酸与抑制MH7A细胞分泌炎症因子之间的关系。结果:酶解前后鹿筋不同的超滤组分中,DSNP-5、DSEP-5对MH7A细胞增殖抑制的作用最强（P<0.05）,且能够抑制细胞炎症因子NO、IL-6的分泌。质量浓度为25～200 μg/mL时,DSNP-5给药组炎症因子（NO、IL-6）的释放量均低于DSEP-5给药组,具有显著差异（P<0.05）,说明DSNP-5抑制能力更强。酶解前后鹿筋的氨基酸组成基本一致,但含量存在明显差异,其中甘氨酸既是特征性差异成分,又与抑制MH7A细胞分泌炎症因子NO、IL-6密切相关,且DSNP-5的甘氨酸含量（31.01%）高于DSEP-5的甘氨酸含量（28.91%）。结论:甘氨酸为鹿筋酶解前后与抗炎活性相关的差异氨基酸,初步探究酶解对鹿筋抗炎活性的影响,为鹿筋的开发应用提供可靠依据。     

鹿茸血酶解肽对脂多糖诱导的H9c2大鼠心肌细胞损伤的保护作用

为研究鹿茸血酶解肽对脂多糖(LPS)诱导H9c2大鼠心肌细胞损伤的保护作用,本研究利用LPS刺激H9c2细胞建立损伤模型。选用卡托普利为阳性对照药。MTT法测定不同浓度(25、50、100、200、400μg/m L)的鹿茸血酶解肽对H9c2细胞增殖抑制活性的影响;酶联免疫法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量。并分析鹿茸血酶解肽的氨基酸组成。结果表明,与模型组比较,不同浓度(25、50、100、200、400μg/m L)的鹿茸血酶解肽均可显著抑制受损伤的H9c2增殖和TNF-α、IL-6、IL-1β的释放(p0.05),模型组的TNF-α、IL-6、IL-1β释放量分别为:531.05、185.41、70.03pg/m L,在200μg/m L质量浓度下,鹿茸血酶解肽对上述三种炎症因子释放的抑制作用最显著(p0.001),其释放量分别为:357.93、148.69、62.72pg/m L。对LPS诱导H9c2细胞损伤具有保护作用的鹿茸血酶解肽中富含赖氨酸,含量占总氨基酸组成的17.81%。以上结果说明鹿茸血酶解肽可以抑制受损伤的H9c2细胞增殖,同时减少炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的释放,通过抑制炎症因子的分泌来发挥其对LPS诱导的H9c2细胞损伤的保护作用。     

响应面法优化鹿鞭肽酶解工艺及体外补肾健骨活性分析

目的：确定碱性蛋白酶酶解鹿鞭肽最佳工艺条件,并探究其体外补肾健骨活性。方法：以酶解温度、pH、酶解时间和酶用量为影响因素,水解度为响应指标,在单因素实验的基础上,结合Box-Behnken方法进行响应面试验设计,获得酶解鹿鞭肽的最佳工艺;探究不同浓度的鹿鞭肽对小鼠睾丸间质细胞（TM3）的存活率以及睾酮（Testosterone,T）的分泌影响和对成骨细胞（MC3T3-E1）的存活率、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活力以及骨钙素（Osteocalcin,OCN）的分泌影响。结果：最佳酶解工艺条件为温度51℃,pH8.7,时间4.1 h,酶用量1300 U/g,此时水解度为40.36%±0.22%;体外活性实验结果表明,TM3细胞不同浓度（25、50、100、200μg/mL）给药组与模型组相比较,均可显著提高细胞存活率和睾酮的分泌（P<0.05）,并在50μg/mL质量浓度下,鹿鞭酶解肽对TM3细胞的T分泌促进作用最强,其分泌量为42.47 ng/mL;MC3T3-E1细胞不同浓度（25、50、100、200μg/mL）给药组与模型组相比较,细胞存活...