多重PCR鉴定动物源空肠弯曲菌和结肠弯曲菌方法的建立

建立鉴定空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR(mPCR)方法。方法 分别以16S rRNA、马尿酸酶和16S-23S rRNA基因为靶序列设计特异性引物,建立多重PCR方法检测37株菌株样品,同时采用ⁱⁿgene CAM nested PCR检测试剂盒检测验证,进行结果比较分析。结果 该多重PCR方法可扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他对照菌株均未扩增出条带,具有较好的特异性;检测敏感性可达0.81pg/μl空肠弯曲菌DNA,0.93pg/μl结肠弯曲菌DNA。多重PCR方法和试剂盒检测结果的符合率为100%,二者与国标GB/T 4789.9—2008方法的符合率达97%以上。结论 本试验建立的多重PCR方法操作快速方便、节约试验成本,具有较好的特异性、敏感性和重复性,可用于弯曲菌的鉴定。     

氦氖激光照射对小鼠脾淋巴细胞增殖反应影响的试验研究

目的：研究氦氖激光照射对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。方法：以BALB/c小鼠为研究对象，应用7.33，11.00,14.67,22.00和36.67j/cm^2五种剂量的氦氖激光器照射小鼠哈德腺，连续照射8d，并于照射开始后第3、6、9、13和第17d动脉监测实验鼠脾淋巴细胞增殖反反应：结果:7.33,11.00,14.67和22.00j/cm^2四个剂量组均可增强脾淋巴细胞增殖反应，但11.00，14.67和22.00j/cm^2三个剂量组在第3d就达到峰值，此后逐步下降，而7.33j/cm^2剂量组直到第9d才达到峰值，且维持时间最短。与此相反的是，36.67j/cm^2剂量组则在第3d就出现抑制效应，直至第13d才恢复至正常水平。结论：适当剂量的氦氖激光照射可对小鼠脾淋巴细胞增殖反应产生增强效应，而过大剂量He-Ne激光则对免疫机能产生抑制效应。     

低能量激光照射对S180腹水瘤小鼠外周血免疫细胞数量影响的研究

本试验系统地研究了低能量氮氦光照射对S180腹水瘤小鼠外周血免疫细胞数量的影响。应用7.33、11.00、14.67、22.00和29.33j/cm^2五种照射剂量，对接种S180纤维肉瘤细胞的BALB/c小鼠做内眼角照射，连续照射6天。在接种肿瘤细胞后第4、8和第12d，分别对5只小鼠进行断尾采血，对外周血细胞进行分类计数。结果表明：接种肿瘤后第4天，所有低能激光照射组白细胞、淋巴细胞、中性幼稚细胞数量均出现显著升高，其中尤以29.33j/cm^2组最为明显；但此后该组淋巴细胞及中性幼稚细胞数量开始明显下降，而7.33-22.00j/cm^2组则持续上升至12天时才出现下降趋势。相对而言，29.33j/cm^2组与肿瘤对照组变化具有相似性，其核右移出现的时间较早，程度也最为严重，而其它四个LELI组则较为轻微。     

激光联用环磷酰胺对荷瘤鼠外周血IgG影响的实验研究

以小鼠S180腹水瘤为动物实验模型．对氦氖激光照射与化疗药物环磷酰胺(CYT)联合应用对S180荷瘤鼠外周血IgG含量影响作了系统性研究。应用11．00，14．67和22．00J／cm^2三种剂量氦氖激光照射荷瘤鼠内眼角，同时联合应用化疗药物环磷酰胺,动态监测S180荷瘤鼠外周血IgG含量的变化。结果表明,CYT联合应用氦氖激光照射组IgG含量均高于单纯应用CYT组。     

肉鸡屠宰环节金黄色葡萄球菌污染定量评估研究

目的解析某大型肉鸡屠宰场中金黄色葡萄球菌的风险和关键防控点,为肉鸡屠宰过程金黄色葡萄球菌污染的科学防控提供指导。方法通过某大型肉鸡屠宰场金黄色葡萄球菌的监测和调研,应用@RISK 7软件建立金黄色葡萄球菌污染的定量评估模型,对肉鸡屠宰四个环节(烫洗煺毛、净膛、清洗预冷和分割传送)进行定量评估。结果初步探明了鸡肉中金黄色葡萄球菌在屠宰加工过程中的消长变化规律,清洗预冷环节和分割传送环节是金黄色葡萄球菌污染的主要风险环节,预冷池水中金黄色葡萄球菌浓度和工人手部带菌程度是肉鸡屠宰加工过程中金黄色葡萄球菌的关键风险点(相关系数分别为0.62和0.50)。结论对肉鸡屠宰环节的金黄色葡萄球菌进行关键控制点识别和精准采取控制措施,可有效保障终端鸡肉产品的卫生安全。     

山东地区生猪和家禽屠宰环节沙门菌血清型分布

目的了解山东地区生猪和家禽屠宰环节沙门菌血清型分布,为进一步开展动物源性产品风险评估提供数据。方法 2014年9~12月从山东省部分屠宰场采集分离的335株沙门菌,应用液态悬浮芯片技术对沙门菌菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原和附加靶蛋白(AT)的基因进行检测,然后运用Salmonella serotyping assay软件分析鉴定血清型。结果 335株沙门菌中299株共分为29个血清型,另有36株未分型,优势血清型主要为德尔卑沙门菌(S.Derby,24.8%,83/335、)和肠炎沙门菌(S.enteritidis,15.2%,51/335)。德尔卑沙门菌、汤卜逊沙门菌(S.Thompson)和阿贡纳沙门菌(S.Agona)在生猪和家禽屠宰场中都有分布;生猪屠宰场以德尔卑沙门菌(39.8%,64/161)为主,其次为鼠伤寒沙门菌(S.typhimurium,19.3%,31/161)和汤卜逊沙门菌(13.7%,22/161);家禽屠宰场中以肠炎沙门菌(28.7%,50/174)、印第安纳沙门菌(S.Indiana,12.1%,21/174)和德尔卑沙门菌(10.9%,19/174)为主。另外,不同地区屠宰场的沙门菌血清型呈差异分布,生猪屠宰场中除鲁中部外,其他地区主要血清型为德尔卑沙门菌;家禽屠宰场中,鲁东和鲁西地区主要是肠炎沙门菌,鲁东北地区以德尔卑沙门菌为主;鲁中部地区分离株以汤卜逊沙门菌为主。结论山东省屠宰场中的沙门菌污染比较严重,且有多种血清型,需加强屠宰环节的致病菌监控,降低动物产品在屠宰环节受沙门菌污染的风险。     

提高气相色谱-质谱法检测氯霉素灵敏度的研究

研究气相色谱-质谱法(GC-MS)分析氯霉素的方法,综合国内外的文献资料提供的参数为参考,经过长时间的分析和研究,优化建立一套检测灵敏度更高的质谱仪器参数。     

肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性分析及ERIC-PCR分型

目的：了解肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性情况以及各生产环节菌株间亲缘关系,为临床用药及菌株追踪溯源提供依据。方法：采用微量肉汤稀释法对171 株肠炎沙门氏菌进行13 种抗菌药物药敏实验;采用肠杆菌基因间重复共有序列-聚合酶链式反应（enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction,ERIC-PCR）法对33 株不同生产环节耐药菌株进行分子分型;采用SPSS 20.0软件、Gel-Pro Analyer 4.0和NTSYS pc 2.1软件进行分析。结果：171 株肠炎沙门氏菌对13 种药物耐药情况不同,其中对氨苄西林耐药情况最严重,耐药率高达90.06%,对恩诺沙星、氧氟沙星最为敏感,耐药率均仅为5.26%;不同环节间耐药性差异极显著（P＜0.01）;多重耐药率高达95.32%,共有26 种耐药谱型。不同环节的33 株肠炎沙门氏菌分为4 种（Ⅰ～Ⅳ）基因型,遗传相似性在66%～100%,Ⅰ型为优势基因型;基因型相同的菌株耐药谱不一定相同,反之,耐药谱相同的菌株基因型不一定相同。结论：肉鸡生产链条中沙门氏菌对多种抗菌药物产生耐药性,且耐药谱种类繁多;沙门氏菌能够沿着生产链进行水平传播,肉鸡场环节菌株基因型相对复杂,菌株基因型与耐药表型之间无明显相关性。     

氦氖激光对鼠体液免疫因子IL-2影响的实验研究

为探讨氦氖激光照射对小鼠脾淋巴细胞IL—2诱生活性的影响，以BALB／c小鼠为研究对象，应用7．33，11．00，14．67，22．00和36．67J／cm^25种剂量的氦氖激光作小鼠内眼角照射，连续照射8天，并于照射开始后第3，6，9，13和17天动态监测实验鼠脾淋巴细胞IL—2诱生活性。结果表明，以日剂量为7．33，11．00，14．67和22．00J／cm^2氦氖激光照射小鼠后，IL—2活性出现不同程度的增强或升高，而36．67J／cm^2剂量组却呈现降低趋势。由此可见，适当剂量的低能量激光照射可对小鼠IL-2诱生活性产生增强效应，而过大剂量氦氖激光照射则对IL—2诱生活性产生抑制效应。     

山东地区大肠杆菌的耐药性及分子分型研究

目的了解山东地区肉鸡养殖环节大肠杆菌的分布情况,初步揭示山东地区大肠杆菌分离株的耐药性及分子流行规律和特征,为该菌的分子溯源及风险评估提供依据。方法选取山东地区2000—2012年肉鸡养殖场分离的42株大肠杆菌为研究对象,用13种抗菌药物进行药物敏感性试验,选用脉冲场凝胶电泳(PFGE)及多位点序列分型(MLST)两种分型方法对菌株进行分析。结果 PFGE方法可分为34个带型,菌株之间的相似系数为60%~100%,带型比较分散,未发现绝对优势的带型;MLST方法得到18个序列型(ST),菌株的7个管家基因均有不同程度的变异;耐药性结果显示,42株菌均为多重耐药,对氨苄西林(AM)、复方新诺明(SXT)和氧氟沙星(NOR)的耐药率较高,分别为97.62%、92.86%和90.48%。结论山东省部分地区肉鸡养殖场中大肠杆菌耐药谱较广,耐药现象比较严重,菌株基因呈多态性,菌株分布具有一定的时间性和地区性。