产壳聚糖酶海洋Paenibacillus chitinolyticus CLT08的鉴定及酶学性质研究

目前用于制备壳寡糖的壳聚糖酶具有酶活性较低、酸稳定性较差等问题。本研究从连云港海州湾泥样中筛选产壳聚糖酶菌株,并对菌株进行鉴定、酸稳定性和酶学性质研究。结果表明,通过平板透明圈初筛和摇瓶发酵复筛,获得酸稳定性较好的壳聚糖酶产生菌株CLT08,随后利用形态学特征、生理生化测定及16S rDNA序列扩增与分析,鉴定菌CLT08为Paenibacillus chitinolyticus。菌株CLT08产壳聚糖酶最适温度为45 ℃,最适pH为4.0;Zn2+对酶有显著的激活作用,对Ba2+、Co2+、Fe2+有显著抑制作用。壳聚糖经CLT08壳聚糖酶水解后其聚合度≥6。此研究结果为该酶的进一步研究奠定了基础。     

产黑芥子酶鞘氨醇杆菌属菌株RJ35的筛选、鉴定及酶学性质

从油菜田的土壤中筛选到1株产黑芥子酶菌株RJ35，对其进行形态学与分子生物学鉴定，并对RJ35产的黑芥子酶进行纯化和酶学性质研究。菌株鉴定结果显示RJ35为鞘氨醇杆菌属。通过超滤浓缩及凝胶层析对黑芥子酶进行纯化，结果显示该黑芥子酶分子质量约为100 kDa。酶学性质研究结果显示该黑芥子酶的最适pH值和最适温度分别为7.5和40℃，且金属离子对其无显著激活作用。高效液相色谱测定结果表明该黑芥子酶可水解萝卜种子提取物产生萝卜硫素。当粗酶液在最适条件下水解萝卜种子提取物30 min时，萝卜硫素产率可达5.95 mg/g（占种子提取物质量计）。本研究结果为微生物源黑芥子酶的开发及应用奠定了实验基础。